Detecção de Transferência Horizontal de Genes Mediada por Plasmídeos Conjugativos Naturais em E. coli

A conjugação representa um dos principais mecanismos que facilitam a transferência horizontal de genes em bactérias Gram-negativas. Este trabalho descreve métodos para o estudo da mobilização de plasmídeos conjugativos de ocorrência natural, utilizando como exemplo dois plasmídeos de ocorrência natural. Esses protocolos dependem da presença diferencial de marcadores selecionáveis no plasmídeo doador, receptor e conjugativo. Especificamente, os métodos descritos incluem 1) a identificação de plasmídeos conjugativos naturais, 2) a quantificação das taxas de conjugação em cultura sólida e 3) a detecção diagnóstica dos genes de resistência a antibióticos e tipos de replicões plasmídicos em receptores transconjugantes por reação em cadeia da polimerase (PCR). Os protocolos aqui descritos foram desenvolvidos no contexto do estudo da ecologia evolutiva da transferência horizontal de genes, para rastrear a presença de plasmídeos conjugativos portadores de genes de resistência a antibióticos em bactérias encontradas no ambiente. A transferência eficiente de plasmídeos conjugativos observada nesses experimentos em cultura destaca a relevância biológica da conjugação como um mecanismo que promove a transferência horizontal de genes em geral e a disseminação da resistência aos antibióticos em particular.