Detección de transferencia horizontal de genes mediada por plásmidos conjugativos naturales en E. coli

La conjugación representa uno de los principales mecanismos que facilitan la transferencia horizontal de genes en bacterias gramnegativas. Este trabajo describe métodos para el estudio de la movilización de plásmidos conjugativos naturales, utilizando dos plásmidos naturales como ejemplo. Estos protocolos se basan en la presencia diferencial de marcadores seleccionables en donante, receptor y plásmido conjugativo. Específicamente, los métodos descritos incluyen 1) la identificación de plásmidos conjugativos naturales, 2) la cuantificación de las tasas de conjugación en cultivo sólido, y 3) la detección diagnóstica de los genes de resistencia a antibióticos y los tipos de replicón plásmido en receptores transconjugados por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los protocolos descritos aquí se han desarrollado en el contexto del estudio de la ecología evolutiva de la transferencia horizontal de genes, para detectar la presencia de plásmidos conjugativos portadores de genes de resistencia a los antibióticos en bacterias que se encuentran en el medio ambiente. La transferencia eficiente de plásmidos conjugativos observada en estos experimentos en cultivo destaca la relevancia biológica de la conjugación como un mecanismo que promueve la transferencia horizontal de genes en general y la propagación de la resistencia a los antibióticos en particular.