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Biology

Cultivo, congelación, procesamiento e imágenes de organoides y esferoides completos mientras aún están en un hidrogel

Published: December 23rd, 2022

DOI:

10.3791/64563

1Research Institute for Health Sciences and Technologies (SABITA), Istanbul Medipol University, 2Cellorama, 3Cancer and Stem Cell Research Center, Maltepe University, 4Department of Histology and Embryology, School of Medicine, Maltepe University, 5Department of Medical Biology, School of Medicine, Maltepe University, 6School of Medicine, Koc University

Abstract

Los organoides y esferoides, estructuras de cultivo tridimensionales en los laboratorios de cultivo celular, son cada vez más reconocidos como modelos superiores en comparación con los modelos de cultivo bidimensionales, ya que imitan mejor el cuerpo humano y tienen ventajas sobre los estudios en animales. Sin embargo, estos estudios comúnmente enfrentan problemas con la reproducibilidad y la consistencia. Durante los largos procesos experimentales, con transferencias de organoides y esferoides entre diferentes recipientes de cultivo celular, pipeteo y centrifugación, estas estructuras de crecimiento 3D susceptibles y frágiles a menudo se dañan o se pierden. En última instancia, los resultados se ven afectados significativamente, ya que las estructuras 3D no pueden mantener las mismas características y calidad. Los métodos descritos aquí minimizan estos pasos estresantes y garantizan un entorno seguro y consistente para organoides y esferoides a lo largo de la secuencia de procesamiento mientras todavía están en un hidrogel en un dispositivo multipropósito. Los investigadores pueden cultivar, congelar, descongelar, procesar, teñir, etiquetar y luego examinar la estructura de organoides o esferoides bajo varios instrumentos de alta tecnología, desde microscopios confocales hasta microscopios electrónicos, utilizando un solo dispositivo multipropósito. Esta tecnología mejora la reproducibilidad, fiabilidad y validez de los estudios, al tiempo que mantiene un entorno estable y protector para las estructuras de cultivo 3D durante el procesamiento. Además, eliminar pasos estresantes minimiza los errores de manejo, reduce el tiempo necesario y disminuye el riesgo de contaminación.

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