使用高分辨率呼吸测定法实时分析原代人视网膜色素上皮细胞中的生物能量学

视网膜色素上皮细胞（RPE）的代谢功能障碍是视网膜疾病的关键致病驱动因素，例如年龄相关性黄斑变性（AMD）和增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）。由于RPE是高度代谢活跃的细胞，其代谢状态的改变反映了其健康和功能的变化。高分辨率呼吸测定法允许通过分别量化细胞外酸化率（ECAR）和耗氧率（OCR）对糖酵解和线粒体氧化磷酸化（OXPHOS）两种主要生物能量途径进行实时动力学分析。以下是对原代人视网膜色素上皮细胞（H-RPE）进行高分辨率呼吸测量的优化方案。该协议详细描述了产生RPE的生物能量谱所涉及的步骤，以确定其基础和最大OXPHOS和糖酵解能力。将H-RPE暴露于针对线粒体和糖酵解机制的不同药物注射中可产生确定的生物能量谱，从中可以计算出关键的代谢参数。该协议强调了与羰基氰对三氟甲氧基苯腙（FCCP）相比，BAM15作为解偶联剂的增强反应，以诱导RPE的最大呼吸能力。该方案可用于研究不同疾病条件下RPE的生物能量状态，并测试新药在恢复RPE基础代谢状态方面的功效。