Production de cellules tueuses naturelles à partir de cellules souches humaines à potentiel élargi

La différenciation des cellules tueuses naturelles (NK) des cellules souches pluripotentes humaines permet la recherche et la fabrication de produits cellulaires de qualité clinique pour l’immunothérapie. Décrit ici est un protocole en deux phases qui utilise un milieu commercial sans sérum et un cocktail de cytokines (interleukine [IL]-3, IL-7, IL-15, facteur de cellules souches [SCF] et ligand tyrosine kinase 3 de type FMS [Ftl3L]) pour différencier les cellules souches à potentiel étendu humain (hEPSC) en cellules qui possèdent des propriétés de cellules NK in vitro avec une technologie de culture à la fois en 3 dimensions (3D) et en 2 dimensions (2D). En suivant ce protocole, les cellules NK CD3-CD56+ ou CD45+CD56+ sont générées de manière constante. Lorsqu’ils sont cocultivés avec des cibles tumorales pendant 3 heures, les produits différenciés présentent une légère cytotoxicité par rapport à une lignée cellulaire permanente indépendante de l’IL-2, les cellules NK92mi. Le protocole préserve la complexité du microenvironnement de différenciation par la génération de structures 3D, facilitant ainsi l’étude des relations spatiales entre les cellules immunitaires et leurs niches. Pendant ce temps, le système de culture 2D permet la validation phénotypique de routine de la différenciation cellulaire sans nuire à la niche de différenciation délicate.