Generering og billeddannelse af muse- og humane epitelorganoider fra normalt væv og tumorbrystvæv uden passage

Organoider er en pålidelig metode til modellering af organvæv på grund af deres selvorganiserende egenskaber og tilbageholdelse af funktion og arkitektur efter formering fra primært væv eller stamceller. Denne metode til organoidgenerering giver afkald på enkeltcelledifferentiering gennem flere passager og bruger i stedet differentiel centrifugering til at isolere brystepitelorganoider fra mekanisk og enzymatisk dissocieret væv. Denne protokol giver en strømlinet teknik til hurtigt at producere små og store epitelorganoider fra både muse- og humant brystvæv ud over teknikker til organoidindlejring i kollagen og kælder ekstracellulær matrix. Desuden gives instruktioner til in-gel-fiksering og immunofluorescerende farvning med det formål at visualisere organoidmorfologi og densitet. Disse metoder er velegnede til utallige downstream-analyser, såsom co-kultivering med immunceller og ex vivo-metastasemodellering via kollageninvasionsassay. Disse analyser tjener til bedre at belyse celle-celleadfærd og skabe en mere fuldstændig forståelse af interaktioner inden for tumormikromiljøet.