Zebrafish Tol2-systemet: En modulær og fleksibel gateway-baseret transgenesetilgang

Føtale alkoholspektrumforstyrrelser (FASD) er kendetegnet ved et meget variabelt sæt strukturelle defekter og kognitive svækkelser, der opstår på grund af prænatal ethanoleksponering. På grund af FASD's komplekse patologi har dyremodeller vist sig at være afgørende for vores nuværende forståelse af ethanol-inducerede udviklingsfejl. Zebrafisk har vist sig at være en stærk model til at undersøge ethanol-inducerede udviklingsfejl på grund af den høje grad af bevarelse af både genetik og udvikling mellem zebrafisk og mennesker. Som modelsystem besidder zebrafisk mange egenskaber, der gør dem ideelle til udviklingsstudier, herunder et stort antal eksternt befrugtede embryoner, der er genetisk medgørlige og gennemskinnelige. Dette giver forskere mulighed for præcist at kontrollere timingen og doseringen af ethanoleksponering i flere genetiske sammenhænge. Et vigtigt genetisk værktøj, der er tilgængeligt i zebrafisk, er transgenese. Imidlertid kan generering af transgene konstruktioner og etablering af transgene linjer være kompleks og vanskelig. For at løse dette problem har zebrafiskforskere etableret det transposonbaserede Tol2-transgenesesystem. Dette modulære system bruger en multisite Gateway-kloningsmetode til hurtig samling af komplette Tol2-transposonbaserede transgene konstruktioner. Her beskriver vi den fleksible Tol2-systemværktøjskasse og en protokol til generering af transgene konstruktioner, der er klar til zebrafisktransgenese og deres anvendelse i ethanolstudier.