Het Zebrafish Tol2-systeem: een modulaire en flexibele gateway-gebaseerde transgenesebenadering

Foetale alcoholspectrumstoornissen (FASD) worden gekenmerkt door een zeer variabele reeks structurele defecten en cognitieve stoornissen die optreden als gevolg van prenatale blootstelling aan ethanol. Vanwege de complexe pathologie van FASD zijn diermodellen van cruciaal belang gebleken voor ons huidige begrip van door ethanol geïnduceerde ontwikkelingsdefecten. Zebravissen hebben bewezen een krachtig model te zijn om door ethanol geïnduceerde ontwikkelingsdefecten te onderzoeken vanwege de hoge mate van behoud van zowel genetica als ontwikkeling tussen zebravissen en mensen. Als modelsysteem bezitten zebravissen veel eigenschappen die ze ideaal maken voor ontwikkelingsstudies, waaronder grote aantallen uitwendig bevruchte embryo's die genetisch traceerbaar en doorschijnend zijn. Dit stelt onderzoekers in staat om de timing en dosering van blootstelling aan ethanol in meerdere genetische contexten nauwkeurig te regelen. Een belangrijk genetisch hulpmiddel dat beschikbaar is bij zebravissen is transgenese. Het genereren van transgene constructies en het vaststellen van transgene lijnen kan echter complex en moeilijk zijn. Om dit probleem aan te pakken, hebben zebravisonderzoekers het op transposon gebaseerde Tol2-transgenesesysteem opgezet. Dit modulaire systeem maakt gebruik van een multisite Gateway-kloonbenadering voor de snelle assemblage van complete Tol2 transposon-gebaseerde transgene constructies. Hier beschrijven we de flexibele Tol2-systeemtoolbox en een protocol voor het genereren van transgene constructies die klaar zijn voor zebravistransgenese en hun gebruik in ethanolstudies.