Zebrafish Tol2-systemet: En modulær og fleksibel gateway-basert transgenesetilnærming

Føtale alkoholspektrumforstyrrelser (FASD) er preget av et svært variabelt sett med strukturelle defekter og kognitive funksjonsnedsettelser som oppstår på grunn av prenatal etanoleksponering. På grunn av den komplekse patologien til FASD har dyremodeller vist seg å være kritiske for vår nåværende forståelse av etanolinduserte utviklingsdefekter. Sebrafisk har vist seg å være en kraftig modell for å undersøke etanolinduserte utviklingsdefekter på grunn av den høye graden av bevaring av både genetikk og utvikling mellom sebrafisk og mennesker. Som modellsystem har sebrafisk mange egenskaper som gjør dem ideelle for utviklingsstudier, inkludert et stort antall eksternt befruktede embryoer som er genetisk håndterbare og gjennomskinnelige. Dette gjør det mulig for forskere å nøyaktig kontrollere tidspunktet og doseringen av etanoleksponering i flere genetiske sammenhenger. Et viktig genetisk verktøy som er tilgjengelig i sebrafisk er transgenese. Imidlertid kan generering av transgene konstruksjoner og etablering av transgene linjer være komplisert og vanskelig. For å løse dette problemet har sebrafiskforskere etablert det transposonbaserte Tol2-transgenesesystemet. Dette modulære systemet bruker en multisite Gateway-kloningstilnærming for rask montering av komplette Tol2 transposonbaserte transgene konstruksjoner. Her beskriver vi den fleksible Tol2-systemverktøykassen og en protokoll for generering av transgene konstruksjoner klare for sebrafisktransgenese og deres bruk i etanolstudier.