Zebrafiskens Tol2-system: En modulär och flexibel gateway-baserad transgenesmetod

Fetala alkoholspektrumstörningar (FASD) kännetecknas av en mycket varierande uppsättning strukturella defekter och kognitiva funktionsnedsättningar som uppstår på grund av prenatal etanolexponering. På grund av FASD: s komplexa patologi har djurmodeller visat sig vara avgörande för vår nuvarande förståelse av etanolinducerade utvecklingsdefekter. Zebrafisk har visat sig vara en kraftfull modell för att undersöka etanolinducerade utvecklingsdefekter på grund av den höga graden av bevarande av både genetik och utveckling mellan zebrafisk och människor. Som modellsystem har zebrafiskar många attribut som gör dem idealiska för utvecklingsstudier, inklusive ett stort antal externt befruktade embryon som är genetiskt lätthanterliga och genomskinliga. Detta gör det möjligt för forskare att exakt kontrollera tidpunkten och doseringen av etanolexponering i flera genetiska sammanhang. Ett viktigt genetiskt verktyg som finns i zebrafisk är transgenes. Att generera transgena konstruktioner och etablera transgena linjer kan dock vara komplicerat och svårt. För att ta itu med detta problem har zebrafiskforskare etablerat det transposonbaserade Tol2-transgenessystemet. Detta modulära system använder en multisite Gateway-kloningsmetod för snabb montering av kompletta Tol2-transposonbaserade transgena konstruktioner. Här beskriver vi den flexibla verktygslådan för Tol2-systemet och ett protokoll för att generera transgena konstruktioner redo för zebrafisktransgenes och deras användning i etanolstudier.