Långtidsodling av enskilda Caenorhabditis elegans på fasta medier för longitudinell fluorescensövervakning och aversiva interventioner

Caenorhabditis elegans används ofta för att studera åldrande biologi. Standardpraxis i C. elegans åldringsstudier är att odla grupper av maskar på fasta nematodtillväxtmedier (NGM), vilket möjliggör effektiv insamling av data på populationsnivå för överlevnad och andra fysiologiska fenotyper, och periodisk provtagning av subpopulationer för fluorescerande biomarkörkvantifiering. Begränsningar för detta tillvägagångssätt är oförmågan att (1) följa enskilda maskar över tid för att utveckla åldersbanor för fenotyper av intresse och (2) övervaka fluorescerande biomarkörer direkt i samband med odlingsmiljön. Alternativa odlingsmetoder använder flytande kultur eller mikrofluidik för att övervaka enskilda djur över tid, i vissa fall inklusive fluorescenskvantifiering, med avvägningen att odlingsmiljön är kontextuellt skild från fast NGM. WorMotel är en tidigare beskriven mikrofabricerad flerbrunnsanordning för odling av isolerade maskar på fast NGM. Varje mask hålls i en brunn innehållande fast NGM omgiven av en vallgrav fylld med kopparsulfat, ett kontaktavvisande medel för C. elegans, vilket möjliggör longitudinell övervakning av enskilda djur. Vi finner kopparsulfat otillräckligt för att förhindra maskar från att fly när de utsätts för aversiva ingrepp som är vanliga i åldrande forskning, inklusive kostbegränsning, patogena bakterier och kemiska medel som inducerar cellulär stress. Multibrunnsanordningarna är också gjutna av polydimetylsiloxan, vilket ger höga bakgrundsartefakter vid fluorescensavbildning. Detta protokoll beskriver ett nytt tillvägagångssätt för odling av isolerade rundmaskar på fast NGM med kommersiellt tillgängliga polystyrenmikrobrickor, ursprungligen utformade för humant leukocytantigen (HLA) typning, vilket möjliggör mätning av överlevnad, fysiologiska fenotyper och fluorescens över livslängden. En palmitinsyrabarriär hindrar maskar från att fly, även i närvaro av aversiva förhållanden. Varje platta kan odla upp till 96 djur och anpassar sig enkelt till en mängd olika förhållanden, inklusive kostbegränsning, RNAi och kemiska tillsatser, och är kompatibel med automatiserade system för insamling av livslängds- och aktivitetsdata.