تحليل صورة التشفير الشريطي المتعدد للتنميط المناعي وتوصيف الخرائط المكانية في تحليل الخلية الواحدة لعينات أنسجة البارافين

تعد تقنية التصوير متعددة الإرسال باستخدام الترميز الشريطي للأجسام المضادة مع قليل النوكليوتيدات ، والتي تكتشف بالتتابع حوائط متعددة في نفس قسم الأنسجة ، منهجية فعالة لتقييم الورم تعمل على تحسين فهم البيئة المكروية للورم. يتم تحقيق تصور تعبير البروتين في الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين عندما يتم تلدين فلوروفور معين إلى رمز شريطي مرتبط بالأجسام المضادة عبر oligonucleotides التكميلية ثم يتم إجراء تصوير العينة. في الواقع ، تسمح هذه الطريقة باستخدام لوحات قابلة للتخصيص لأكثر من 40 جسما مضادا في تفاعل تلطيخ واحد للأنسجة. تتوافق هذه الطريقة مع الأنسجة المجمدة الطازجة ، والأنسجة المثبتة بالفورمالين ، والأنسجة المضمنة بالبارافين ، والخلايا المستزرعة ، وخلايا الدم أحادية النواة المحيطية ، مما يعني أنه يمكن للباحثين استخدام هذه التقنية لعرض مجموعة متنوعة من أنواع العينات بدقة خلية واحدة. تبدأ هذه الطريقة ببروتوكول تلطيخ وتثبيت يدوي ، ويتم تطبيق جميع الرموز الشريطية للأجسام المضادة باستخدام كوكتيل الأجسام المضادة. أداة سوائل التلوين مؤتمتة بالكامل وتؤدي دورات تكرارية لوضع العلامات والتصوير وإزالة الفلوروفورات المتميزة طيفيا حتى يتم تصوير جميع المؤشرات الحيوية باستخدام مجهر مضان قياسي. ثم يتم جمع الصور وتجميعها عبر جميع دورات التصوير لتحقيق دقة خلية واحدة لجميع العلامات. لا يسمح التلوين أحادي الخطوة وإزالة الفلوروفور اللطيفة بتحليل العلامات الحيوية المتعددة للغاية فحسب ، بل يحافظ أيضا على العينة لإجراء تحليل إضافي في اتجاه مجرى النهر إذا رغبت في ذلك (على سبيل المثال ، تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوزين). علاوة على ذلك ، يتيح برنامج تحليل الصور معالجة الصور - تعويض الانجراف ، وطرح الخلفية ، وتجزئة الخلايا ، والتجميع - بالإضافة إلى تصور وتحليل الصور والأنماط الظاهرية للخلايا لإنشاء خرائط الشبكة المكانية. باختصار ، تستخدم هذه التقنية نظام الموائع الدقيقة المحوسب والمجهر الفلوري للتهجين المتكرر ، وتصوير ، وتجريد مجسات الحمض النووي ذات العلامات الفلورية المكملة للأجسام المضادة المرتبطة بالأنسجة قليلة النوكليوتيدات.