多重条形码图像分析，用于石蜡组织样品单细胞分析中的免疫分析和空间映射表征

使用抗体条形码和寡核苷酸的多重成像技术，可依次检测同一组织切片中的多个表位，是一种有效的肿瘤评估方法，可提高对肿瘤微环境的理解。当特定的荧光团通过互补寡核苷酸 退 火到抗体结合的条形码上，然后进行样品成像时，可以实现福尔马林固定石蜡包埋组织中蛋白质表达的可视化;实际上，该方法允许在单个组织染色反应中使用40多种抗体的可定制组合。该方法与新鲜冷冻组织、福尔马林固定、石蜡包埋组织、培养细胞和外周血单核细胞兼容，这意味着研究人员可以使用该技术以单细胞分辨率查看各种样品类型。该方法从手动染色和固定方案开始，并使用抗体混合物应用所有抗体条形码。染色流体仪器是全自动的，可执行标记、成像和去除光谱不同的荧光团的迭代循环，直到使用标准荧光显微镜对所有生物标志物进行成像。然后在所有成像周期中收集和编译图像，以实现所有标记物的单细胞分辨率。一步染色和温和的荧光团去除不仅允许高度多重的生物标志物分析，而且如果需要，还可以保存样品以进行额外的下游分析（例如，苏木精和伊红染色）。此外，图像分析软件支持图像处理漂移补偿、背景减法、细胞分割和聚类，以及图像和细胞表型的可视化和分析，以生成空间网络图。总之，该技术采用计算机化的微流体系统和荧光显微镜来迭代杂交、成像和剥离荧光标记的DNA探针，这些探针与组织结合的寡核苷酸偶联抗体互补。