पैराफिन ऊतक नमूनों के एकल-सेल विश्लेषण में इम्यूनोप्रोफाइलिंग और स्थानिक मानचित्रण लक्षण वर्णन के लिए मल्टीप्लेक्स बारकोडिंग छवि विश्लेषण

ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स के साथ एंटीबॉडी बारकोडिंग का उपयोग करके मल्टीप्लेक्स इमेजिंग तकनीक, जो क्रमिक रूप से एक ही ऊतक अनुभाग में कई एपिटोप्स का पता लगाती है, ट्यूमर मूल्यांकन के लिए एक प्रभावी पद्धति है जो ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट की समझ में सुधार करती है। फॉर्मेलिन-फिक्स्ड, पैराफिन-एम्बेडेड ऊतकों में प्रोटीन अभिव्यक्ति का विज़ुअलाइज़ेशन तब प्राप्त किया जाता है जब एक विशिष्ट फ्लोरोफोरे को पूरक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स के माध्यम से एंटीबॉडी-बाउंड बारकोड में लगाया जाता है और फिर नमूना इमेजिंग की जाती है; दरअसल, यह विधि एकल ऊतक धुंधला प्रतिक्रिया में 40 से अधिक एंटीबॉडी के अनुकूलन योग्य पैनलों के उपयोग की अनुमति देती है। यह विधि ताजा जमे हुए ऊतक, फॉर्मेलिन-फिक्स्ड, पैराफिन-एम्बेडेड ऊतक, सुसंस्कृत कोशिकाओं और परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं के साथ संगत है, जिसका अर्थ है कि शोधकर्ता एकल-सेल रिज़ॉल्यूशन पर विभिन्न प्रकार के नमूना प्रकारों को देखने के लिए इस तकनीक का उपयोग कर सकते हैं। यह विधि एक मैनुअल धुंधला और फिक्सिंग प्रोटोकॉल के साथ शुरू होती है, और सभी एंटीबॉडी बारकोड एक एंटीबॉडी कॉकटेल का उपयोग करके लागू किए जाते हैं। धुंधला तरल पदार्थ उपकरण पूरी तरह से स्वचालित है और लेबलिंग, इमेजिंग और वर्णक्रमीय रूप से अलग फ्लोरोफोरे को हटाने के पुनरावृत्ति चक्र करता है जब तक कि सभी बायोमाकर्स को मानक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग करके चित्रित नहीं किया जाता है। फिर छवियों को सभी मार्करों के लिए एकल-सेल रिज़ॉल्यूशन प्राप्त करने के लिए सभी इमेजिंग चक्रों में एकत्र और संकलित किया जाता है। एकल-चरण धुंधला और कोमल फ्लोरोफोरे हटाने से न केवल अत्यधिक मल्टीप्लेक्स बायोमार्कर विश्लेषण की अनुमति मिलती है, बल्कि वांछित होने पर अतिरिक्त डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए नमूने को संरक्षित भी किया जाता है (जैसे, हेमटोक्सीलिन और ईओसिन धुंधला)। इसके अलावा, छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर छवि प्रसंस्करण-बहाव मुआवजा, पृष्ठभूमि घटाव, सेल विभाजन और क्लस्टरिंग-साथ ही स्थानिक नेटवर्क मानचित्रों की पीढ़ी के लिए छवियों और सेल फेनोटाइप के विज़ुअलाइज़ेशन और विश्लेषण को सक्षम करता है। सारांश में, यह तकनीक एक कम्प्यूटरीकृत माइक्रोफ्लुइडिक्स सिस्टम और फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप को पुनरावर्ती रूप से संकरण, छवि और स्ट्रिप फ्लोरोसेंटली लेबल डीएनए जांच के लिए नियोजित करती है जो ऊतक-बाध्य, ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड-संयुग्मित एंटीबॉडी के पूरक हैं।