파라핀 조직 샘플의 단일 세포 분석에서 면역 프로파일링 및 공간 매핑 특성 분석을 위한 멀티플렉스 바코드 이미지 분석

동일한 조직 절편에서 여러 에피토프를 순차적으로 검출하는 올리고뉴클레오티드와 함께 항체 바코드를 사용하는 멀티플렉스 이미징 기술은 종양 미세환경에 대한 이해를 높이는 효과적인 종양 평가 방법론입니다. 포르말린 고정, 파라핀 포매 조직에서 단백질 발현의 시각화는 특정 형광단이 상보적인 올리고뉴클레오티드를 통해 항체 결합 바코드에 어닐링된 다음 샘플 이미징을 수행할 때 달성됩니다. 실제로, 이 방법은 단일 조직 염색 반응에서 40개 이상의 항체로 구성된 맞춤형 패널을 사용할 수 있습니다. 이 방법은 신선 냉동 조직, 포르말린 고정, 파라핀 포매 조직, 배양 세포 및 말초 혈액 단핵 세포와 호환되므로 연구자들은 이 기술을 사용하여 단일 세포 분해능으로 다양한 샘플 유형을 볼 수 있습니다. 이 방법은 수동 염색 및 고정 프로토콜로 시작하며 모든 항체 바코드는 항체 칵테일을 사용하여 적용됩니다. 염색 유체 기기는 완전히 자동화되어 있으며 표준 형광 현미경을 사용하여 모든 바이오마커를 이미지화할 때까지 스펙트럼적으로 구별되는 형광단을 라벨링, 이미징 및 제거하는 반복적인 주기를 수행합니다. 그런 다음 모든 이미징 주기에 걸쳐 이미지를 수집하고 컴파일하여 모든 마커에 대한 단일 셀 해상도를 달성합니다. 단일 단계 염색 및 부드러운 형광단 제거를 통해 고도로 다중화된 바이오마커 분석이 가능할 뿐만 아니라 원하는 경우 추가 다운스트림 분석(예: 헤마톡실린 및 에오신 염색)을 위해 샘플을 보존할 수 있습니다. 또한 이미지 분석 소프트웨어는 이미지 처리(드리프트 보상, 배경 빼기, 세포 분할 및 클러스터링)뿐만 아니라 공간 네트워크 맵 생성을 위한 이미지 및 세포 표현형의 시각화 및 분석을 가능하게 합니다. 요약하면, 이 기술은 전산화된 미세유체 시스템과 형광 현미경을 사용하여 조직 결합, 올리고뉴클레오티드 접합 항체에 상보적인 형광 표지 DNA 프로브를 반복적으로 혼성화, 이미징 및 스트립합니다.