Análise de Imagem de Código de Barras Multiplexado para Caracterização de Imunoprofiling e Mapeamento Espacial na Análise Unicelular de Amostras de Parafina

A tecnologia de imagem multiplexada usando código de barras de anticorpos com oligonucleotídeos, que detecta sequencialmente múltiplos epítopos no mesmo corte de tecido, é uma metodologia eficaz para avaliação tumoral que melhora a compreensão do microambiente tumoral. A visualização da expressão de proteínas em tecidos fixados em formalina e emblocados em parafina é obtida quando um fluoróforo específico é recozido em um código de barras ligado a anticorpos via oligonucleotídeos complementares e, em seguida, imagens de amostras são realizadas; De fato, esse método permite o uso de painéis personalizáveis de mais de 40 anticorpos em uma única reação de coloração de tecido. Este método é compatível com tecido fresco congelado, tecido fixado em formalina, tecido embebido em parafina, células cultivadas e células mononucleares do sangue periférico, o que significa que os pesquisadores podem usar essa tecnologia para visualizar uma variedade de tipos de amostra em resolução de célula única. Este método começa com um protocolo manual de coloração e fixação, e todos os códigos de barras de anticorpos são aplicados usando um coquetel de anticorpos. O instrumento de coloração fluídica é totalmente automatizado e realiza ciclos iterativos de marcação, geração de imagens e remoção de fluoróforos espectralmente distintos até que todos os biomarcadores tenham sido imageados usando um microscópio de fluorescência padrão. As imagens são então coletadas e compiladas em todos os ciclos de imagem para alcançar resolução de célula única para todos os marcadores. A coloração em etapa única e a remoção suave do fluoróforo não apenas permitem a análise de biomarcadores altamente multiplexados, mas também preservam a amostra para análise adicional a jusante, se desejado (por exemplo, coloração de hematoxilina e eosina). Além disso, o software de análise de imagens permite o processamento de imagens - compensação de deriva, subtração de fundo, segmentação celular e agrupamento - bem como a visualização e análise das imagens e fenótipos celulares para a geração de mapas de redes espaciais. Em resumo, essa tecnologia emprega um sistema microfluídico computadorizado e um microscópio de fluorescência para hibridizar, obter imagens e retirar sondas de DNA marcadas fluorescentemente que são complementares aos anticorpos conjugados a oligonucleotídeos ligados ao tecido.