原代恒河猴B细胞的基因编辑

B细胞及其后代是高表达抗体的来源。它们的高蛋白表达能力、丰度、易于通过外周血 获得 以及简单过继转移的适应性，使其成为表达重组抗体或其他治疗性蛋白的基因编辑方法的有吸引力的靶标。小鼠和人类原代B细胞的基因编辑是有效的，用于 体内 研究的小鼠模型已经显示出希望，但迄今为止尚未证明大型动物模型的可行性和可扩展性。因此，我们开发了一种在 体外 编辑恒河猴原代B细胞的方案，以使此类研究成为可能。我们报告了使用CRISPR / Cas9对来自外周血单核细胞或脾细胞的原代恒河猴B细胞进行 体外 培养和基因编辑的条件。为了实现大型（<4.5 kb）盒的靶向整合，纳入了一种快速有效的方案，用于使用启用四环素的自沉默腺病毒辅助载体制备重组腺相关病毒血清型6作为同源性定向修复模板。这些协议能够研究恒河猴的前瞻性B细胞疗法。