Edición génica de células B primarias de macaco Rhesus

Las células B y su progenie son las fuentes de anticuerpos altamente expresados. Sus altas capacidades de expresión de proteínas junto con su abundancia, fácil acceso a través de sangre periférica y facilidad para transferencias adoptivas simples los han convertido en un objetivo atractivo para los enfoques de edición de genes para expresar anticuerpos recombinantes u otras proteínas terapéuticas. La edición de genes de células B primarias de ratón y humano es eficiente, y los modelos de ratón para estudios in vivo han demostrado ser prometedores, pero hasta ahora no se ha demostrado la viabilidad y escalabilidad para modelos animales más grandes. Por lo tanto, desarrollamos un protocolo para editar las células B primarias del macaco rhesus in vitro para permitir tales estudios. Informamos las condiciones para el cultivo in vitro y la edición génica de células B primarias de macaco rhesus a partir de células mononucleares de sangre periférica o esplenocitos utilizando CRISPR / Cas9. Para lograr la integración específica de casetes grandes (<4,5 kb), se incluyó un protocolo rápido y eficiente para preparar el serotipo 6 del virus adenoasociado recombinante como plantilla de reparación dirigida por homología utilizando un vector auxiliar adenoviral autosilenciador habilitado para tetraciclina. Estos protocolos permiten el estudio de posibles terapias de células B en macacos rhesus.