En 3D-kulturmetode af sfæroider af embryonale og leverzebrafiskcellelinjer

Fiskecellelinjer er lovende in vitro-modeller til økotoksicitetsvurdering; konventionelle enkeltlagskultursystemer (2D-kultur) har imidlertid velkendte begrænsninger (f.eks. Kulturlevetid og vedligeholdelse af nogle in vivo-cellulære funktioner). Således er 3D-kulturer, såsom sfæroider, blevet foreslået, da disse modeller kan reproducere vævslignende strukturer og bedre genvinde in vivo-betingelserne . Denne artikel beskriver en effektiv, nem og hurtig 3D-kulturprotokol til dannelse af sfæroider med to zebrafisk (Danio rerio) cellelinjer: ZEM2S (embryo) og ZFL (normal hepatocyt). Protokollen består i at platte cellerne i en rundbundet, ultra-lav vedhæftning, 96-brøndplade. Efter 5 dage under orbital omrystning (70 o / min) dannes en enkelt sfærisk pr. Brønd. De dannede sfæroider præsenterer stabil størrelse og form, og denne metode undgår dannelsen af flere sfæroider i en brønd; Det er således ikke nødvendigt at håndplukke sfæroider af lignende størrelser. Letheden, hastigheden og reproducerbarheden af denne sfæroidmetode gør den nyttig til in vitro-test med høj kapacitet.