Einfache und reproduzierbare Low-Density-Primärkultur mit gefrorenem Bestand embryonaler Hippocampus-Neuronen

Neuronale Kultur ist ein wertvolles System zur Bewertung synaptischer Funktionen und Medikamentenscreenings. Insbesondere eine Kultur mit geringer Dichte von primären Hippocampus-Neuronen ermöglicht die Untersuchung einzelner Neuronen oder subzellulärer Komponenten. Wir haben die Lokalisierung subzellulärer Proteine innerhalb eines Neurons durch Immunzytochemie, neuronale Polarität, synaptische Morphologie und ihre Entwicklungsänderung unter Verwendung einer primären Hippocampuskultur mit niedriger Dichte gezeigt. In jüngster Zeit sind gebrauchsfertige gefrorene Bestände von Neuronen kommerziell verfügbar geworden. Diese gefrorenen Neuronenbestände verkürzen den Zeitaufwand für die Vorbereitung von Tierversuchen und tragen auch dazu bei, die Anzahl der verwendeten Tiere zu reduzieren. Hier stellen wir eine reproduzierbare Primärkulturmethode mit niedriger Dichte unter Verwendung einer 96-Well-Platte vor. Wir verwendeten einen kommerziell erhältlichen gefrorenen Vorrat an Neuronen aus dem embryonalen Hippocampus der Ratte. Die Neuronen können langfristig ohne Medienveränderungen stabil kultiviert werden, indem das Wachstum von Gliazellen zu bestimmten Zeitpunkten reduziert wird. Dieser Hochdurchsatz-Assay mit Low-Density-Kultur ermöglicht reproduzierbare bildgebende Auswertungen der synaptischen Plastizität.