Bestemmelse af vaccineimmunogenicitet under anvendelse af bovin monocytafledte dendritiske celler

Dendritiske celler (DC'er) er de mest potente antigenpræsenterende celler (APC'er) i immunsystemet. De patruljerer organismen på udkig efter patogener og spiller en unik rolle i immunsystemet ved at forbinde de medfødte og adaptive immunresponser. Disse celler kan fagocytisere og derefter præsentere fangede antigener til effektorimmunceller, hvilket udløser en bred vifte af immunresponser. Dette papir demonstrerer en standardiseret metode til in vitro-generering af bovin monocytafledte dendritiske celler (MoDC'er) isoleret fra mononukleære celler i kvægperifert blod (PBMC'er) og deres anvendelse til evaluering af vaccineimmunogenicitet.

Magnetisk baseret cellesortering blev brugt til at isolere CD14+ monocytter fra PBMC'er, og tilskud af komplet dyrkningsmedium med interleukin (IL)-4 og granulocyt-makrofagkolonistimulerende faktor (GM-CSF) blev anvendt til at inducere differentieringen af CD14⁺ monocytter til naive MoDC'er. Genereringen af umodne MoDC'er blev bekræftet ved at detektere ekspressionen af større histokompatibilitetskompleks II (MHC II), CD86 og CD40 celleoverflademarkører. En kommercielt tilgængelig rabiesvaccine blev brugt til at pulsere de umodne MoDC'er, som efterfølgende blev dyrket sammen med naive lymfocytter.

Flowcytometrianalysen af de antigenpulserede MoDC'er og lymfocytcokulturen afslørede stimuleringen af T-lymfocytproliferation gennem ekspression af Ki-67-, CD25-, CD4- og CD8-markører. Analysen af mRNA-ekspressionen af IFN-γ og Ki-67 ved anvendelse af kvantitativ PCR viste, at MoDC'erne kunne inducere antigenspecifik priming af lymfocytter i dette in vitro-cokultursystem . Desuden viste IFN-γ-sekretion vurderet ved hjælp af ELISA en signifikant højere titer (**p < 0,01) i rabiesvaccine-pulseret MoDC-lymfocyt-cokultur end i den ikke-antigenpulserede MoDC-lymfocyt-cokultur. Disse resultater viser validiteten af dette in vitro MoDC-assay til måling af vaccineimmunogenicitet, hvilket betyder, at dette assay kan bruges til at identificere potentielle vaccinekandidater til kvæg, inden der fortsættes med in vivo-forsøg , samt i vaccineimmunogenicitetsvurderinger af kommercielle vacciner.