zSpRY-ABE8e के साथ मानव आनुवंशिक रोग के ज़ेब्राफ़िश मॉडलिंग के लिए कुशल PAM-कम आधार संपादन

CRISPR / Cas9 तकनीक ने मानव आनुवंशिक रोगों के मॉडलिंग, रोग रोगजनन का अध्ययन करने और दवा स्क्रीनिंग के लिए ज़ेबराफ़िश के मूल्य में वृद्धि की है, लेकिन प्रोटोस्पेसर आसन्न आकृति (PAM) सीमाएं एकल-न्यूक्लियोटाइड वेरिएंट (एसएनवी) के कारण मानव आनुवंशिक विकारों के सटीक पशु मॉडल बनाने के लिए एक बड़ी बाधा हैं। अब तक, व्यापक पीएएम संगतता वाले कुछ स्पास 9 वेरिएंट ने जेब्राफिश में दक्षता दिखाई है। ज़ेब्राफ़िश में अनुकूलित एसपीआरवाई-मध्यस्थता एडेनिन बेस एडिटर (एबीई), जेडएसआरवाई-एबीई 8 ई और सिंथेटिक रूप से संशोधित जीआरएनए के आवेदन ने पीएएम प्रतिबंध के बिना कुशल एडेनिन-गुआनिन बेस रूपांतरण को सक्षम किया है। यहां वर्णित जेडएसआरवाई-एबीई 8 ई का उपयोग करके जेब्राफिश में पीएएम सीमा के बिना कुशल एडेनिन बेस संपादन के लिए एक प्रोटोकॉल है। ज़ेबराफिश भ्रूण में zSpRY-ABE8e एमआरएनए और कृत्रिम रूप से संशोधित जीआरएनए के मिश्रण को इंजेक्ट करके, एक जेब्राफिश रोग मॉडल का निर्माण एक सटीक उत्परिवर्तन के साथ किया गया था जिसने टीएसआर 2 राइबोसोम परिपक्वता कारक (टीएसआर 2) की एक रोगजनक साइट का अनुकरण किया था। यह विधि रोग तंत्र और उपचार का अध्ययन करने के लिए सटीक रोग मॉडल की स्थापना के लिए एक मूल्यवान उपकरण प्रदान करती है।