Evaluering av autofaginivåer i to forskjellige bukspyttkjertelcellemodeller ved bruk av LC3-immunfluorescens

Autofagi er en spesialisert katabolsk prosess som selektivt nedbryter cytoplasmatiske komponenter, inkludert proteiner og skadede organeller. Autofagi gjør det mulig for celler å fysiologisk reagere på stressstimuli og dermed opprettholde cellulær homeostase. Kreftceller kan modulere autofaginivåene sine for å tilpasse seg ugunstige tilstander som hypoksi, næringsmangel eller skade forårsaket av kjemoterapi. Ductal pankreas adenokarsinom er en av de dødeligste typer kreft. Kreftceller i bukspyttkjertelen har høy autofagiaktivitet på grunn av transkripsjonell oppregulering og posttranslasjonell aktivering av autofagiproteiner.

Her ble PANC-1-cellelinjen brukt som en modell av kreftceller i bukspyttkjertelen, og AR42J pankreatisk acinarcelle cellelinje ble brukt som en fysiologisk modell av høyt differensierte pattedyrceller. Denne studien brukte immunfluorescens av mikrotubuli-assosiert proteinlyskjede 3 (LC3) som en indikator på status for autofagiaktivering. LC3 er et autofagiprotein som i basalforhold viser et diffust distribusjonsmønster i cytoplasma (kjent som LC3-I i denne tilstanden). Autofagi-induksjon utløser konjugering av LC3 til fosfatidyletanolamin på overflaten av nydannede autofagosomer for å danne LC3-II, et membranbundet protein som hjelper til med dannelse og utvidelse av autofagosomer. For å kvantifisere antall merkede autofagiske strukturer ble åpen kildekode-programvaren FIJI brukt ved hjelp av verktøyet "3D Objects Counter".

Målingen av autofagiske nivåer både i fysiologiske forhold og i kreftceller tillater oss å studere modulering av autofagi under ulike forhold som hypoksi, kjemoterapibehandling eller knockdown av visse proteiner.