ברצוננו להודות לדולף ויירס, ורה גורלובה ומארק רוז'ן על שסיפקו לנו באדיבות את YFP. S.D. מכיר בתמיכה כספית ממועצת המחקר ההולנדית (מספר מענק: OCENW. קליין.465).

1. ייצור רקיק המאסטר
<ol><li>קח פרוסת סיליקון נקייה בקוטר 4 אינץ' (10 ס"מ) (ראה טבלת חומרים). נקו אותו עוד יותר באמצעות אוויר בלחץ כדי להסיר חלקיקי אבק.</li>
	<li>הרכיבו את הפרוסת על ציפוי מסתובב, ושחררו בעדינות ~ 5 מ"ל של התנגדות אור שלילית (ראו טבלת חומרים) במרכז הפרוסה. נסו ל?...

מורכבות התא מקשה מאוד על הבנת תאים חיים כאשר חוקרים אותם כמכלול. הפחתת היתירות והקישוריות ההדדית של תאים על ידי בנייה מחדש של רכיבי המפתח במבחנה נחוצה כדי לקדם את הבנתנו את המערכות הביולוגיות וליצור חיקויים תאיים מלאכותיים ליישומים ביוטכנולוגיים22,23,24</su...

לכל התאים יש קרום פלזמה כגבול הפיזי שלהם, וממברנה זו היא למעשה פיגום בצורת דו-שכבה ליפידית הנוצרת על ידי הרכבה עצמית של מולקולות שומנים אמפיפיליות. ליפוזומים הם המקבילים הסינתטיים המינימליים של תאים ביולוגיים; יש להם לומן מימי מוקף פוספוליפידים, היוצרים דו-שכבה ליפידית כאשר קבוצות הראש ההידרופיליות פונות לשלב המימי והזנבות ההידרופוביים קבורים פנימה. יציבות הליפוזומים נשלטת על ידי האפקט ההידרופובי, כמו גם ההידרופיליות בין קבוצות הקוטב, כוחות ואן דר ואלס בין זנבות הפחמן ההידרופוביים, וקשרי המימן בין מולקולות המים והראשים ההידרופיליים 1,2. בהתאם למספר דו-שכבות השומנים, ניתן לסווג את הליפוזומים לשתי קטגוריות עיקריות, כלומר, שלפוחיות חד-שכבתיות המורכבות מדו-שכבה אחת ושלפוחיות רב-שכבתיות הבנויות מדו-שכבות מרובות. שלפוחיות Unilamellar מסווגים עוד יותר על פי גודלם. הם בדרך כלל כדוריים בצורתם, וניתן לייצר אותם במגוון גדלים, כולל שלפוחיות חד-למלריות קטנות (SUV, קוטר 30-100 ננומטר), שלפוחיות חד-למלריות גדולות (LUV, קוטר 100-1,000 ננומטר), ולבסוף, בועיות חד-למלריות ענקיות (GUV, קוטר >1,000 ננומטר)3,4. טכניקות שונות פותחו לייצור ליפוזומים, וניתן לסווג אותן באופן רחב לטכניקות בתפזורת5 וטכניקות מיקרופלואידיות6. טכניקות נפוצות בתפזורת כוללות התייבשות סרט שומנים, אלקטרופורמציה, העברת תחליב הפוך ושחול 7,8,9,10. טכניקות אלה פשוטות ויעילות יחסית, ואלה הן הסיבות העיקריות לשימוש הנרחב בהן בקהילת הביולוגיה הסינתטית. עם זאת, יחד עם זאת, הם סובלים מחסרונות גדולים בכל הנוגע לפיזור בגודל, חוסר שליטה על lamellarity, ויעילות אנקפסולציה נמוכה 7,11. טכניקות כמו אנקפסולציה רציפה של ממשק טיפתי (cDICE)12 וצילום טיפות וסינון גודל (DSSF)13 מתגברות על מגבלות אלה במידה מסוימת.
גישות מיקרופלואידיות עלו לגדולה בעשור האחרון. טכנולוגיה מיקרופלואידית מספקת סביבה ניתנת לשליטה למניפולציה של זרימות נוזלים בתוך מיקרו-ערוצים המוגדרים על-ידי המשתמש הודות לזרימה הלמינרית האופיינית והעברת המסה הנשלטת על ידי דיפוזיה. התקני מעבדה על שבב המתקבלים מציעים אפשרויות ייחודיות לבקרה מרחבית-זמנית של מולקולות, עם נפחי דגימה מופחתים משמעותית ויכולות ריבוב14. פותחו שיטות מיקרופלואידיות רבות לייצור ליפוזומים, כולל סילון פועם 15, טמפלציה של תחליב כפול 16, פליטת קרום חולף 17, העברת תחליב טיפות 18 ומיקוד הידרודינמי 19. טכניקות אלה מייצרות ליפוזומים חד-מפוזרים, חד-למלריים, בגודל תא, עם יעילות אנקפסולציה גבוהה ותפוקה גבוהה.
מאמר זה מפרט את ההליך להרכבת ליפוזום בסיוע אוקטאנול (OLA), שיטה מיקרופלואידית על שבב המבוססת על צביטה הידרודינמית ומנגנון הרטבת ממסעוקב 20 (איור 1). אפשר לקשר את העבודה של OLA לתהליך ניפוח בועות. צומת בן שישה כיוונים ממקד את הפאזה המימית הפנימית (IA), שני זרמים אורגניים נושאי שומנים (LO) ושני זרמים מימיים חיצוניים המכילים פעילי שטח (OA) בנקודה אחת. התוצאה היא טיפות תחליב כפול של מים בתוך (שומנים + אוקטאנול) במים. כאשר טיפות אלה זורמות במורד הזרם, מזעור האנרגיה הבין-פנים, זרימת הגזירה החיצונית והאינטראקציה עם דפנות התעלה מובילים להיווצרות דו-שכבה ליפידית בממשק כאשר כיס הממס מתנתק, וכך נוצרים ליפוזומים חד-למלריים. בהתאם לגודל כיס האוקטאנול, תהליך ההרטבה יכול להימשך עשרות שניות עד כמה דקות. בקצה תעלת היציאה, טיפות האוקטנול הפחות צפופות צפות אל פני השטח, ואילו הליפוזומים הכבדים יותר (עקב תמיסה צפופה יותר) שוקעים לתחתית תא ההדמיה מוכנים לניסויים. כניסוי מייצג, מודגם תהליך של הפרדת פאזה נוזלית-נוזלית (LLPS) בתוך ליפוזומים. לשם כך, הרכיבים הדרושים עטופים בתוך ליפוזומים ב- pH חומצי המונע LLPS. על ידי הפעלה חיצונית של שינוי pH, ולכן, שטף פרוטון transmembrane, טיפות עיבוי מופרד פאזה נוצרות בתוך הליפוזומים. זה מדגיש את יכולות האנקפסולציה והמניפולציה היעילות של מערכת OLA.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-Octanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>No. 297887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL tubes</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>10451043</td>
			<td>Eppendorf 3810X Polypropylene microcentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>No. A2383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy punch</td>
			<td>Darwin microfluidics</td>
			<td>PT-T983-05</td>
			<td>0.5 mm and 3 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate-base</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>No. 71405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>No. 31388</td>
			<td>Mr~6,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct-write optical lithography machine</td>
			<td>Durham Magneto Optics Ltd</td>
			<td>MicroWriter ML3 Baby</td>
			<td>setup and software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DOPC lipid</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>SKU:850375C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F68</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>No. 24040032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass cover slip</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#1, 24 x 40 mm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>No. G2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Thermo Scientific Acros</td>
			<td>No. 124630010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liss Rhod PE lipid</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>SKU:810150C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>No. P7793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoresist</td>
			<td>Micro resist technology GmbH</td>
			<td>EpoCore 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoresist developer</td>
			<td>micro resist technology GmbH</td>
			<td>mr-Dev 600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma cleaner</td>
			<td>Harrick plasma</td>
			<td>PDC-32G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydimethylsiloxane</td>
			<td>Dow</td>
			<td>Sylgard 184</td>
			<td>PDMS and curing agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>No. P7890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine&#8211;FITC Labeled</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>No. P3543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinyl alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>no. P8136</td>
			<td>molecular weight 30,000&#8211;70,000, 87%&#8211;90% hydrolyzed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure controller</td>
			<td>Elveflow&#160;</td>
			<td>OBK1 Mk3+</td>
			<td>Flow controller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotch tape</td>
			<td>Magic Tape Invisible Matt Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon wafer</td>
			<td>Silicon Materials</td>
			<td>0620R16002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin coater&#160;</td>
			<td>Laurell Technologies Corporation</td>
			<td>Model WS-650MZ-23NPP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel 90&#176; Bent PDMS Couplers</td>
			<td>Darwin microfluidics</td>
			<td>PN-BEN-23G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-base</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>No. 252859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon tubing</td>
			<td>Darwin microfluidics</td>
			<td>1/16&#34; OD x 0.02&#34; ID</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV laser&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>365 nm wavelength</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

on-chip octanol-assisted liposome assembly for bioengineering

מיקרופלואידיקה היא כלי נפוץ ליצירת טיפות ובועיות מסוגים שונים באופן מבוקר ובעל תפוקה גבוהה. ליפוזומים הם חיקויים תאיים פשטניים המורכבים מפנים מימי המוקף בדו-שכבה ליפידית; הם בעלי ערך בתכנון תאים סינתטיים ובהבנת היסודות של תאים ביולוגיים בצורה חוץ גופית והם חשובים למדעים יישומיים, כגון הובלת מטענים ליישומים טיפוליים. מאמר זה מתאר פרוטוקול עבודה מפורט עבור טכניקה מיקרופלואידית על שבב, הרכבת ליפוזומים בסיוע אוקטאנול (OLA), לייצור ליפוזומים חד-מפוזרים, בגודל מיקרון ותואמים ביולוגית. OLA מתפקד באופן דומה לניפוח בועות, שבו פאזה מימית פנימית (IA) ופאזה 1-אוקטאנול נושאת שומנים מסביב נצבטות על ידי זרמי נוזל חיצוניים המכילים פעילי שטח. זה מייצר בקלות טיפות תחליב כפול עם כיסי אוקטנול בולטים. כאשר דו-שכבת השומנים מתכנסת בממשק הטיפות, הכיס מתנתק באופן ספונטני ויוצר ליפוזום חד-למלרי שמוכן למניפולציות וניסויים נוספים. OLA מספק מספר יתרונות, כגון יצירת ליפוזום יציב (>10 הרץ), אנקפסולציה יעילה של ביו-חומרים ואוכלוסיות ליפוזומים חד-מפוזרים, ודורש נפחי דגימה קטנים מאוד (~ 50 μL), אשר יכולים להיות קריטיים כאשר עובדים עם ביולוגים יקרים. המחקר כולל פרטים על מיקרו-פבריקציה, ליתוגרפיה רכה ופסיבציה של פני השטח, הדרושים לביסוס טכנולוגיית OLA במעבדה. יישום ביולוגי סינתטי מוכח גם על ידי גרימת היווצרות של עיבויים ביומולקולריים בתוך הליפוזומים באמצעות שטף פרוטון טרנסממברנלי. צפוי כי פרוטוקול וידאו נלווה זה יקל על הקוראים להקים ולפתור בעיות OLA במעבדות שלהם.

מחקר זה מדגים היווצרות של מעובים חסרי קרום באמצעות תהליך של הפרדת פאזה נוזלית-נוזלית (LLPS) בתוך ליפוזומים כניסוי מייצג.
הכנת דוגמאות IA, OA, ES ותמיסת הזנה (FS) מוכנים כדלקמן:
IA: 12% גליצרול, 5 מ"מ דקסטרן, 150 מ"מ KCl, 5 מ"ג/מ"ל פולי-ל-ליזין (PLL), 0.05 מ"ג/מ"ל פולי-ל-ל?...

Watch this Scientific Journal Video about On-Chip Octanol-Assisted Liposome Assembly for Bioengineering at JoVE.com

On-Chip Octanol-Assisted Liposome Assembly for Bioengineering

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הרכבת ליפוזומים בסיוע אוקטאנול (OLA), טכניקה מיקרופלואידית ליצירת ליפוזומים תואמים ביולוגית. OLA מייצרת ליפוזומים חד-מפוזרים בגודל מיקרון עם אנקפסולציה יעילה, המאפשרת ניסויים מיידיים על שבב. פרוטוקול זה צפוי להתאים במיוחד לביולוגיה סינתטית ולמחקר תאים סינתטיים.

הרכבת ליפוזום בסיוע אוקטאנול על שבב לביו-הנדסה

Microfluidics is a widely used tool to generate droplets and vesicles of various kinds in a controlled and high-throughput manner. Liposomes are ...

OLA היא פלטפורמה מיקרופלואידית רב-תכליתית שימושית לקהילת הביולוגיה הסינתטית. בפרט, כדי להנדס ביולוגית תאים מלאכותיים. ליפוזומים מבוססי OLA יכולים לעזור לנו להבין את עקרונות הארגון העצמי בביולוגיה ולבנות מכלולים המחקים תאים.OLA מייצרת ליפוזומים חד-מפוזרים, חד-למינריים, בגודל התא באופן בתפוקה גבוהה וביעילות אנקפסולציה מעולה. זה דורש כמויות מדגם קטנות מאוד, בסדר גודל של 50 מיקרוליטר, ואת הליפוזומים שנוצרו זמינים מיד לניסויים נוספים על שבב. OLA שימושי לחקר תגובות ביולוגיות בתוך מיקרו-כליאה, דינמיקה של שלפוחיות ועיבויים ביומולקולריים והאינטראקציות שלהם עם ממברנות.OLA יושמה גם כפלטפורמה בעלת תפוקה גבוהה לבדיקת תרופות, למשל, כדי לבדוק את החדירות והפעילות הממברנית של מיקרוביאליים. פונקציונליות פני השטח, שהיא טיפול PV, היא שלב קריטי עבור הפרוטוקול ויש לבצע אותה בזהירות כדי למנוע את פתרון ה- PV לכניסה למים הפנימיים ולתעלות אורגניות נושאות שומנים. כמו כן, ערוץ הפוסט-פרודקשן צריך להיות ארוך מספיק כדי שההפרדה של כיסי אוקטאנול תיצור ליפוזומים.קטן גנאר, דוקטורנט מהמעבדה שלי, יעזור לצ'אנג צ'ן להדגים את ההליך. כדי להתחיל, קחו פרוסת סיליקון נקייה בקוטר ארבעה אינץ' ונקו אותה עוד יותר באמצעות אוויר בלחץ כדי להסיר חלקיקי אבק. הרכיבו את הפרוסת על מעיל מסתובב ושחררו בעדינות כחמישה מיליליטר של התנגדות אור שלילית במרכז הוופל.כדי לקבל שכבת photoresist בעובי 10 מיקרומטר, הגדר את הגדרות מעיל הסחיטה על 500 סל"ד למשך 30 שניות עם תאוצה של 100 RRP לשנייה לפיזור ראשוני, ואחריו סיבוב של 60 שניות ב -3, 000 סל"ד עם תאוצה של 500 סל"ד לשנייה. לאחר מכן, סובבו את הפרוסה. אופים את רקיק על צלחת חימום במשך שתי דקות ב 65 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן במשך חמש דקות ב 95 מעלות צלזיוס.לאחר שהפרוסה מתקררת, הרכיבו את הפרוסות בתא ההדפסה של מכונת הליתוגרפיה האופטית הימנית הישירה והזינו את מכלול הליפוזום בסיוע אוקטאנול או עיצוב OLA, לתוך התוכנה. לאחר הדפסת העיצוב, אפו את הוופל בחום של 65 מעלות צלזיוס למשך דקה אחת, ולאחר מכן ב-95 מעלות צלזיוס במשך שלוש דקות. כדי לשטוף את photoresist uncured, לטבול את רקיק בכוס זכוכית המכילה את הפתרון מפתח עד photoresist uncured מוסר במלואו.אפו קשה את הוופל בחום של 150 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות כדי להבטיח שהעיצוב המודפס מחובר היטב למשטח הוופל ולא יורד בתהליך הייצור במורד הזרם. כדי להכין את המכשיר microfluidic, מניחים את רקיק המאסטר על חתיכה מרובעת של אלומיניום לעטוף את רדיד אלומיניום סביב רקיק, יצירת מבנה דמוי היטב. יוצקים בעדינות את תערובת PDMS על רקיק המאסטר.דוגרים על ההרכבה בתנור בחום של 70 מעלות למשך שעתיים לפחות. הוציאו את רקיק המאסטר מהתנור ותנו לו להתקרר. כדי להסיר את הפולידימתילסילוקסאן המוצק, או בלוק PDMS, הסר את רדיד האלומיניום ולאחר מכן קלף בזהירות את בלוק PDMS מקצה רקיק.קח מחליק כיסוי זכוכית שקוף, שפך כ -0.5 מיליליטר PDMS למרכז מגלשת הזכוכית, ופרש אותו על פני החלקת הכיסוי על ידי הטייה עדינה של מגלשת הזכוכית, הבטחת כיסוי מלא של מגלשת הזכוכית עם PDMS. הרכיבו את מגלשת הזכוכית על מעיל הסיבוב. ודא שהוא ממוקם במיקום מרכזי כך שמרכז המגלשה יחפוף למרכז פיר הלחץ.לאחר מכן סובב את מגלשת הזכוכית במהירות של 500 סל"ד למשך 15 שניות בהפרש של 100 סל"ד לשנייה ו-1,000 סל"ד למשך 30 שניות בהפרש של 500 סל"ד לשנייה. הניחו את מגלשת הזכוכית המצופה PDM כשהצד המצופה פונה כלפי מעלה על משטח מוגבה כמו גוש PDMS בצלחת פטרי מכוסה. אופים אותו בחום של 70 מעלות במשך שעתיים.הניחו את בלוק ה-PDMS כאשר התעלות החרוטות פונות כלפי מעלה ואת הזכוכית המצופה ב-PDM החליקו כאשר הצד המצופה פונה כלפי מעלה בתא הוואקום של שואב הפלזמה. הפעל את הוואקום וחשף את התוכן לפלסמת אוויר בתדר רדיו של 12 מגה-הרץ למשך 15 שניות כדי להפעיל את המשטחים. פלזמה חמצן ניתן לראות בצורה של גוון ורדרד.מיד לאחר טיפול הפלזמה, הניחו את מגלשת הזכוכית המצופה PDMS על משטח נקי כאשר צד ה-PDMS פונה כלפי מעלה. הניחו בעדינות את בלוק ה-PDMS כאשר התבנית המיקרופלואידית פונה כעת לכיוון שקופית הזכוכית המצופה ב-PDMS, ומאפשרת להם להיקשר. אופים את המכשירים המלוכדים בחום של 70 מעלות במשך שעתיים.יש לפזר 200 מיקרוליטר של 5% אלכוהול פוליוויניל, או תמיסת OVA, לתוך צינור של 1.5 מיליליטר ולחבר אותו למעמד המאגר המיקרופלואידי. הכנס את הצינור כך שקצה אחד שקוע בתמיסת PVA והקצה השני מחובר לכניסה של התעלה המימית החיצונית של המכשיר המיקרופלואידי. הגדל את הלחץ של הפאזה המימית החיצונית ל -100 מיליבר כדי להזרים את תמיסת PVA בתעלות המימיות החיצוניות.הגדל את הלחצים של הפאזה המימית הפנימית והאורגנית נושאת השומנים ל-120 מיליבר כדי למנוע זרימה חוזרת של תמיסת PVA בתוך תעלות אלה. הזרימו את תמיסת ה-PVA באופן זה במשך כחמש דקות, תוך הבטחת תפקוד מלא של תעלת היציאה. הגדל את הלחץ בתעלות האורגניות והמיימיות הפנימיות נושאות השומנים לשני פסים כדי להסיר את תמיסת ה- PVA, ונתק מיד את הצינורית מהכניסה המימית החיצונית.במקביל, השתמש בצינור המחובר לתעלת לחץ שלילי כדי להסיר עודפי PVA מתעלת היציאה. אפו את המכשיר בחום של 120 מעלות במשך 15 דקות ותנו לו להתקרר לפני השימוש. ניתן לאחסן את המכשיר בתנאי סביבה למשך חודש אחד לפחות.מחלקים את התמיסות לשלושה צינורות 1.5 מיליליטר ומרכיבים אותם. חברו אותם לשבב המיקרופלואידי שטופל ב-PVA והפעילו לחץ חיובי על שלושת הערוצים, כ-100 מיליבר בתעלות האורגניות המימיות והליפידיות הפנימיות וכ-200 מיליבר בתעלה המימית החיצונית. ברגע שכל שלושת השלבים מתחילים לזרום יחד בצומת, יש לוודא שמתחיל ייצור תחליב כפול ולהתאים את הלחץ בהתאם לאיכותו.ככל שטיפות התחליב הכפול זורמות, האוקטאנול כל הכיסים הופכים בולטים יותר ויותר ולבסוף נצבטים ויוצרים ליפוזומים. תמונת שדה בהיר של הדור המהיר של טיפות תחליב כפול מוצגת כאן. תעלת השומנים הפלואורסצנטית מראה היווצרות אוקטאנול בכל כיס עקב הרטבה חלקית.התעלה המימית הפנימית מראה את האנקפסולציה של חלבון פלואורסצנטי צהוב. הרטבת כיס האוקטאנול בתעלת היציאה היוצרת ליפוזום מוצגת באיור זה. תמונה זו מייצגת את הסכמה של המעבר תלוי ה- pH של התמיסה ההומוגנית של פוליליזין ו- ATP העטופים בליפוזום לפוליליזין ATP coacervates מופרד פאזה.הסביבה החומצית הראשונית בליפוזום הופכת את המטען המולקולרי של ATP לנייטרלי, ומעכבת את הקרישה ההדדית. כאשר ה- pH בתוך הליפוזומים מתאזן עם עליית ה- pH המיושמת חיצונית, ATP מקבל מטען שלילי, מה שגורם לקרישה הדדית. ההתפלגות המרחבית של פוליליזין והממברנה ותמונות הזמן של היווצרות פוליליזין ATP coacervates בתוך הליפוזומים מוצגים באיור זה.המהדורה החיצונית של חיץ בסיסי מעלה את רמת ה- pH בתוך הליפוזומים במהלך דקות ויוזמת קו-סרבציה. T שווה אפס דקות מתייחס לזמן שלפני התרחשות אירוע הקרישה הראשון. תוך כדי הדגמת הליך, חיוני להתאים בסבלנות את לחץ הערוץ על מנת ליצור ייצור תחליב כפול קבוע.OLA והווריאציות שלו שימשו במחקרים מגוונים, למשל, גדילה וחלוקה של ליפוזומים המבינים את הדינמיקה של עיבויים ביומולקולריים, ביטוי תאי של חלבון, כמו גם אנקפסולציה של חיידקים. אז במקביל, אנחנו מאמינים ש-OLA היא פלטפורמה רב-תכליתית לביולוגיה סינתטית.

הרכבת ליפוזום בסיוע אוקטאנול על שבב לביו-הנדסה

Abstract