Estabelecimento, Manutenção, Diferenciação, Manipulação Genética e Transplante de Organoides de Glândulas Lacrimais de Camundongos e Humanos

A glândula lacrimal é um órgão essencial para a homeostase da superfície ocular. Ao produzir a parte aquosa do filme lacrimal, protege o olho do estresse de dessecação e insultos externos. Pouco se sabe sobre a (pato)fisiologia das glândulas lacrimais devido à falta de modelos in vitro adequados. A tecnologia organoide provou ser uma plataforma experimental útil para múltiplos órgãos. Aqui, compartilhamos um protocolo para estabelecer e manter organoides de glândulas lacrimais de camundongos e humanos a partir de biópsias de glândulas lacrimais. Ao modificar as condições de cultura, aumentamos a funcionalidade organoide da glândula lacrimal. A funcionalidade organoide pode ser investigada através de um ensaio de "choro", que envolve a exposição dos organoides da glândula lacrimal a neurotransmissores selecionados para desencadear a liberação de lágrimas em seu lúmen. Explicamos como imaginar e quantificar esse fenômeno. Para investigar o papel de genes de interesse na homeostase da glândula lacrimal, estes podem ser geneticamente modificados. Descrevemos detalhadamente como modificar geneticamente organoides da glândula lacrimal usando editores de base - desde o design de RNA guia até a genotipagem de clones organoides. Por fim, mostramos como sondar o potencial regenerativo de organoides da glândula lacrimal humana por implante ortotópico em camundongos. Juntos, este conjunto de ferramentas abrangente fornece recursos para usar organoides da glândula lacrimal humana e de camundongos para estudar a (pato)fisiologia da glândula lacrimal.