Выделение внеклеточных везикул с низким содержанием эндотоксинов, полученных из линий раковых клеток

Внеклеточные везикулы (ВВ) представляют собой гетерогенную популяцию мембранных везикул, высвобождаемых клетками in vitro и in vivo. Их вездесущность и значительная роль в качестве носителей биологической информации делают их интригующими объектами исследования, требующими надежных и повторяющихся протоколов для их выделения. Однако реализовать весь их потенциал сложно, поскольку все еще существует множество технических препятствий, связанных с их исследованиями (например, правильное приобретение). В данном исследовании представлен протокол выделения малых ЭВ (по номенклатуре MISEV 2018) из супернатанта культуры линий опухолевых клеток на основе дифференциального центрифугирования. Протокол включает в себя рекомендации о том, как избежать загрязнения эндотоксинами во время выделения электромобилей и как правильно их оценивать. Загрязнение электромобилей эндотоксинами может значительно затруднить последующие эксперименты или даже замаскировать их истинные биологические эффекты. С другой стороны, упущенное из виду присутствие эндотоксинов может привести к неправильным выводам. Это имеет особое значение, когда речь идет о клетках иммунной системы, включая моноциты, потому что моноциты составляют популяцию, которая особенно чувствительна к остаткам эндотоксина. Поэтому настоятельно рекомендуется проводить скрининг EV на загрязнение эндотоксинами, особенно при работе с чувствительными к эндотоксину клетками, такими как моноциты, макрофаги, клетки-супрессоры миелоидного происхождения или дендритные клетки.