Modelo de Fibrilação Ventricular de Longa Duração em Corações Isolados de Rato

Resumo

Este protocolo apresenta um modelo de fibrilação ventricular de longa duração em corações de ratos induzida por estimulação contínua com corrente alternada de baixa voltagem. Esse modelo tem alta taxa de sucesso, é estável, confiável e reprodutível, tem baixo impacto na função cardíaca e causa apenas lesão miocárdica leve.

Resumo

A fibrilação ventricular (FV) é uma arritmia fatal com alta incidência em pacientes cardíacos, mas a parada da PV sob perfusão é um método negligenciado de parada intraoperatória no campo da cirurgia cardíaca. Com os recentes avanços da cirurgia cardíaca, a demanda por estudos prolongados de PV sob perfusão tem aumentado. Entretanto, o campo carece de modelos animais simples, confiáveis e reprodutíveis de fibrilação ventricular crônica. Esse protocolo induz a PV de longa duração por meio da estimulação elétrica do epicárdio em corrente alternada (CA). Diferentes condições foram utilizadas para induzir a PV, incluindo estimulação contínua com baixa ou alta voltagem para induzir FV de longa duração e estimulação por 5 min com baixa ou alta voltagem para induzir FV espontânea de longa duração. As taxas de sucesso das diferentes condições, bem como as taxas de lesão miocárdica e recuperação da função cardíaca, foram comparadas. Os resultados mostraram que a estimulação contínua de baixa voltagem induziu FV de longa duração e que 5 min de estimulação de baixa voltagem induziram FV espontânea de longa duração com lesão miocárdica leve e alta taxa de recuperação da função cardíaca. No entanto, o modelo de PV de longa duração continuamente estimulado de baixa voltagem apresentou maior taxa de sucesso. A estimulação de alta voltagem proporcionou maior taxa de indução de FV, mas mostrou baixa taxa de sucesso na desfibrilação, má recuperação da função cardíaca e lesão miocárdica grave. Com base nesses resultados, a estimulação contínua por CA epicárdica de baixa voltagem é recomendada por sua alta taxa de sucesso, estabilidade, confiabilidade, reprodutibilidade, baixo impacto na função cardíaca e leve lesão miocárdica.

Introdução

A cirurgia cardíaca geralmente é realizada por toracotomia, com bloqueio da aorta e perfusão com solução cardioplégica para parada do coração. A repetição da cirurgia cardíaca pode ser mais desafiadora do que a cirurgia inicial, com maiores taxas de complicações e mortalidade ^1,2,3. Além disso, a abordagem convencional de esternotomia mediana pode causar danos aos vasos da ponte atrás do esterno, da aorta ascendente, do ventrículo direito e de outras estruturas importantes. Sangramento extenso devido à separação do tecido conjuntivo, infecção da ferida esternal e ost....

Protocolo

Todos os procedimentos e protocolos experimentais utilizados nesta investigação foram revisados e aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais do Hospital Geral de PLA.

1. Preparação do aparelho de Langendorff

1. Prepare o tampão Krebs-Henseleit (K-H). Para preparar o tampão K-H, adicione o seguinte à água destilada: NaCl 118,0 mM, KCl 4,7 mM, MgSO 4 1,2 mM, NaH 2 PO₄ 1,2 mM, CaCl₂1,8 mM, NaHCO ₃ 25,0 mM, glicose 11,1 mM e EDTA 0,5 mM.
2. Preparar o sistema de perfusão Langendorff modificado.
   1. Gaseificar continuamente o balão contendo tampão K-....

Resultados

Foram utilizados 57 ratos nos experimentos, dos quais 30 preencheram os critérios de inclusão. Os animais incluídos foram divididos em cinco grupos, com seis animais em cada grupo: grupo controle (Grupo C), grupo FV de longa duração continuamente estimulada por baixa voltagem (Grupo LC), grupo de FV de longa duração continuamente estimulada de alta voltagem (Grupo HC), grupo de PV espontânea de longa duração induzida por baixa voltagem (Grupo LI) e grupo de FV espontânea de longa duração induzida por alta vo.......

Discussão

Este protocolo estabelece um modelo animal de FV de longa duração em corações isolados de ratos que não foi relatado anteriormente. Além disso, diferentes condições de estimulação elétrica foram comparadas neste estudo. Este estudo fornece um modelo para estudos relacionados à parada de fibrilação ventricular durante cirurgia cardíaca.

A taxa de sucesso do modelo é um indicador muito importante que está relacionado a pessoal, tempo e custos econômicos. Em modelos de PV, a tax.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
0 Non-absorbable suture	Ethicon, Inc.		Preparation of the isolated heart
95% O2 + 5% CO2	Beijing BeiYang United Gas Co., Ltd.		K-H buffer
AcqKnowledge software	BIOPAC Systems Inc.	Version 4.2.1	Software
Automatic biochemistry analyzer	Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.	Chemray 800	CK-MB assay
BIOPAC research systems	BIOPAC Systems Inc.	MP150	Hardware
Blunt needle (20 G, TWLB)	Tianjin Hanaco MEDICAL Co., Ltd.	H-113AP-S	Modified Langendorff perfusion system
Calcium chloride	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd	10005861	K-H buffer
CK-MB assay kits	Changchun Huili Biotech Co., Ltd.	C060	CK-MB assay
Curved forcep	Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.		Preparation of the isolated heart
EDTA	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd	10009717	K-H buffer
Electrical stimulator	BIOPAC Systems Inc.	STEMISOC	Hardware
Filter	Tianjin Hanaco MEDICAL Co., Ltd.	H-113AP-S
Glucose	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd	63005518	K-H buffer
Heparin sodium	Tianjin Biochem Pharmaceutical Co., Ltd.	H120200505	Preparation of the isolated heart
Isoflurane	RWD Life Science Co.,LTD	21082201	Preparation of the isolated heart
Magnesium sulfate	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd	20025118	K-H buffer
Needle electrodes	BIOPAC Systems Inc.	EL452	Hardware
Ophthalmic clamp	Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.		Preparation of the isolated heart
Ophthalmic forceps	Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.		Preparation of the isolated heart
Ophthalmic scissors	Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.		Preparation of the isolated heart
Perfusion tube	Tianjin Hanaco MEDICAL Co., Ltd.	H-113AP-S	Modified Langendorff perfusion system
Potassium chloride	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd	10016318	K-H buffer
Sodium bicarbonate	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd	10018960	K-H buffer
Sodium chloride	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd	10019318	K-H buffer
Sodium dihydrogen phosphate dihydrate	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd	20040718	K-H buffer
Sprague-Dawley (SD) rats	SPF (Beijing) biotechnology Co., Ltd.	Male, 300-350g	Preparation of the isolated heart
Thermometer	Jiangsu Jingchuang Electronics Co., Ltd.	GSP-6	Modified Langendorff perfusion system
Tissueforceps	Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.		Preparation of the isolated heart
Tissue scissors	Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.		Preparation of the isolated heart
Toothed forceps	Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.		Preparation of the isolated heart
Ventilator	Chengdu Instrument Factory	DKX-150	Preparation of the isolated heart
Water bath1	Ningbo Scientz Biotechnology Co.,Ltd.	SC-15	Modified Langendorff perfusion system
Water bath2	Shanghai Yiheng Technology Instrument Co., Ltd.	DK-8D	Modified Langendorff perfusion system