Высокопроизводительные сократительные измерения интактных мышечных волокон мыши, встроенных в гидрогель, с использованием оптической системы

Культура клеток in vitro является мощным инструментом для оценки клеточных процессов и тестирования терапевтических стратегий. Для скелетных мышц наиболее распространенные подходы включают либо дифференцировку миогенных клеток-предшественников в незрелые миотубы, либо кратковременную культуру ex vivo изолированных отдельных мышечных волокон. Ключевым преимуществом культуры ex vivo по сравнению с in vitro является сохранение сложной клеточной архитектуры и сократительных характеристик. Здесь мы подробно описываем экспериментальный протокол выделения интактных мышечных волокон flexor digitorum brevis у мышей и их последующей культуры ex vivo . В этом протоколе мышечные волокна встроены в гидрогель на основе фибрина и матричного матричного слоя базальной мембраны для иммобилизации волокон и поддержания их сократительной функции. Затем мы описываем методы оценки сократительной функции мышечных волокон с использованием высокопроизводительной системы сократимости на основе оптики. Встроенные мышечные волокна электрически стимулируются, чтобы вызвать сокращения, после чего их функциональные свойства, такие как укорочение саркомера и скорость сокращения, оцениваются с использованием количественного определения на основе оптики. Объединение культуры мышечных волокон с этой системой позволяет проводить высокопроизводительные испытания влияния фармакологических агентов на сократительную функцию и исследования генетических мышечных нарушений ex vivo . Наконец, этот протокол также может быть адаптирован для изучения динамических клеточных процессов в мышечных волокнах с использованием микроскопии живых клеток.