قياسات انقباضية عالية الإنتاجية لألياف عضلات الفأر السليمة المضمنة في الهيدروجيل باستخدام نظام قائم على البصريات

تعد زراعة الخلايا في المختبر أداة قوية لتقييم العمليات الخلوية واختبار الاستراتيجيات العلاجية. بالنسبة للعضلات الهيكلية ، تتضمن الأساليب الأكثر شيوعا إما تمييز الخلايا السلفية العضلية المنشأ إلى أنابيب عضلية غير ناضجة أو الثقافة خارج الجسم الحي قصيرة المدى لألياف العضلات الفردية المعزولة. تتمثل إحدى الفوائد الرئيسية للثقافة خارج الجسم الحي في المختبر في الاحتفاظ بالبنية الخلوية المعقدة والخصائص المقلصة. هنا ، نقوم بتفصيل بروتوكول تجريبي لعزل ألياف العضلات المثنية المثنية السليمة من الفئران وثقافتها اللاحقة خارج الجسم الحي. في هذا البروتوكول ، يتم تضمين ألياف العضلات في هيدروجيل مصفوفة الغشاء القائم على الفيبرين والغشاء القاعدي لشل حركة الألياف والحفاظ على وظيفتها المقلصة. ثم نصف طرق تقييم وظيفة انقباض الألياف العضلية باستخدام نظام انقباض عالي الإنتاجية قائم على البصريات. يتم تحفيز الألياف العضلية المدمجة كهربائيا للحث على الانقباضات ، وبعد ذلك يتم تقييم خصائصها الوظيفية ، مثل تقصير القطعة العضلية وسرعة الانقباض ، باستخدام القياس الكمي القائم على البصريات. يسمح اقتران زراعة الألياف العضلية بهذا النظام بإجراء اختبار عالي الإنتاجية لتأثيرات العوامل الدوائية على وظيفة الانقباض والدراسات خارج الجسم الحي لاضطرابات العضلات الوراثية. أخيرا ، يمكن أيضا تكييف هذا البروتوكول لدراسة العمليات الخلوية الديناميكية في ألياف العضلات باستخدام الفحص المجهري للخلايا الحية.