प्रकाशिकी-आधारित प्रणाली का उपयोग करके हाइड्रोगेल-एम्बेडेड बरकरार माउस मांसपेशी फाइबर के उच्च-थ्रूपुट सिकुड़ा हुआ माप

इन विट्रो सेल कल्चर सेलुलर प्रक्रियाओं का आकलन करने और चिकित्सीय रणनीतियों का परीक्षण करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है। कंकाल की मांसपेशियों के लिए, सबसे आम दृष्टिकोण में या तो मायोजेनिक पूर्वज कोशिकाओं को अपरिपक्व मायोट्यूब में अलग करना या पृथक व्यक्तिगत मांसपेशी फाइबर की अल्पकालिक पूर्व विवो संस्कृति शामिल है। इन विट्रो पर पूर्व विवो संस्कृति का एक महत्वपूर्ण लाभ जटिल सेलुलर वास्तुकला और सिकुड़ा हुआ विशेषताओं का प्रतिधारण है। यहां, हम चूहों से बरकरार फ्लेक्सर डिजिटोरम ब्रेविस मांसपेशी फाइबर के अलगाव और उनके बाद के पूर्व विवो संस्कृति के लिए एक प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल का विस्तार करते हैं। इस प्रोटोकॉल में, तंतुओं को गतिहीन करने और उनके सिकुड़ा हुआ कार्य बनाए रखने के लिए मांसपेशियों के तंतुओं को एक फाइब्रिन-आधारित और तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स हाइड्रोगेल में एम्बेडेड किया जाता है। फिर हम प्रकाशिकी-आधारित, उच्च-थ्रूपुट अनुबंध प्रणाली का उपयोग करके मांसपेशी फाइबर सिकुड़ा हुआ कार्य का आकलन करने के तरीकों का वर्णन करते हैं। एम्बेडेड मांसपेशी फाइबर को संकुचन को प्रेरित करने के लिए विद्युत रूप से उत्तेजित किया जाता है, जिसके बाद उनके कार्यात्मक गुणों, जैसे कि सरकोमेरे शॉर्टनिंग और सिकुड़ा हुआ वेग, का मूल्यांकन प्रकाशिकी-आधारित परिमाणीकरण का उपयोग करके किया जाता है। इस प्रणाली के साथ मांसपेशी फाइबर संस्कृति युग्मन संकुचनशील कार्य पर औषधीय एजेंटों के प्रभावों के उच्च-थ्रूपुट परीक्षण और आनुवंशिक मांसपेशी विकारों के पूर्व विवो अध्ययन की अनुमति देता है। अंत में, इस प्रोटोकॉल को लाइव-सेल माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके मांसपेशी फाइबर में गतिशील सेलुलर प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए भी अनुकूलित किया जा सकता है।