光学系を用いたヒドロゲル包埋無傷マウス筋線維のハイスループット収縮測定(英語)

in vitro細胞培養は、細胞プロセスを評価し、治療戦略をテストするための強力なツールです。骨格筋の場合、最も一般的なアプローチは、筋原性前駆細胞を未成熟筋管に分化させるか、単離された個々の筋線維の短期間のex vivo培養のいずれかです。in vitroに対するex vivo培養の主な利点は、複雑な細胞構造と収縮特性の保持です。ここでは、マウスからの無傷の屈筋指筋線維の単離とその後のex vivo培養のための実験プロトコルについて詳しく説明します。このプロトコルでは、筋線維は、線維を固定化し、それらの収縮機能を維持するために、フィブリンベースおよび基底膜マトリックスヒドロゲルに埋め込まれる。次に、光学ベースのハイスループット収縮性システムを使用して筋線維収縮機能を評価する方法について説明します。埋め込まれた筋線維は電気的に刺激されて収縮を誘発し、その後、サルコメア短縮や収縮速度などの機能特性が光学ベースの定量化を使用して評価されます。筋繊維培養をこのシステムと組み合わせることで、収縮機能に対する薬理学的物質の効果のハイスループット試験と遺伝性筋障害のex vivo研究が可能になります。最後に、このプロトコルは、生細胞顕微鏡を使用して筋線維の動的細胞プロセスを研究するためにも適用できます。