광학 기반 시스템을 사용한 하이드로겔 내장 온전한 마우스 근육 섬유의 고처리량 수축 측정

체외 세포 배양은 세포 과정을 평가하고 치료 전략을 테스트하는 강력한 도구입니다. 골격근의 경우 가장 일반적인 접근 방식은 근형성 전구 세포를 미성숙 근관으로 분화하거나 분리된 개별 근섬유의 단기 생체 외 배양을 포함합니다. in vitro에 비해 생체 외 배양의 주요 이점은 복잡한 세포 구조와 수축 특성을 유지하는 것입니다. 여기에서 우리는 생쥐에서 온전한 굴근 손가락 브레비스 근육 섬유를 분리하고 후속 생체 외 배양을 위한 실험 프로토콜을 자세히 설명합니다. 이 프로토콜에서 근육 섬유는 섬유를 고정하고 수축 기능을 유지하기 위해 피브린 기반 및 기저막 매트릭스 하이드로겔에 내장되어 있습니다. 그런 다음 광학 기반의 고처리량 수축성 시스템을 사용하여 근섬유 수축 기능을 평가하는 방법을 설명합니다. 내장된 근육 섬유는 수축을 유도하기 위해 전기적으로 자극되며, 그 후 육종 단축 및 수축 속도와 같은 기능적 특성은 광학 기반 정량화를 사용하여 평가됩니다. 이 시스템과 근육 섬유 배양을 결합하면 수축 기능에 대한 약리학적 제제의 효과에 대한 고처리량 테스트와 유전적 근육 장애에 대한 생체 외 연구가 가능합니다. 마지막으로, 이 프로토콜은 생세포 현미경을 사용하여 근섬유의 동적 세포 과정을 연구하는 데에도 적용할 수 있습니다.