Optik tabanlı bir sistem kullanarak hidrojel gömülü bozulmamış fare kas liflerinin yüksek verimli kasılma ölçümleri

İn vitro hücre kültürü, hücresel süreçleri değerlendirmek ve terapötik stratejileri test etmek için güçlü bir araçtır. İskelet kası için en yaygın yaklaşımlar, miyojenik progenitör hücrelerin olgunlaşmamış miyotüplere ayırt edilmesini veya izole edilmiş bireysel kas liflerinin kısa süreli ex vivo kültürünü içerir. Ex vivo kültürün in vitro üzerindeki önemli bir yararı, karmaşık hücresel mimarinin ve kontraktil özelliklerin korunmasıdır. Burada, bozulmamış fleksör digitorum brevis kas liflerinin farelerden izolasyonu ve ardından ex vivo kültürü için deneysel bir protokolü detaylandırıyoruz. Bu protokolde, kas lifleri, lifleri hareketsiz hale getirmek ve kasılma işlevlerini sürdürmek için fibrin bazlı ve bazal membran matris hidrojel içine gömülür. Daha sonra optik tabanlı, yüksek verimli bir kontraktilite sistemi kullanarak kas lifi kasılma fonksiyonunu değerlendirmek için yöntemler açıklıyoruz. Gömülü kas lifleri, kasılmaları indüklemek için elektriksel olarak uyarılır, daha sonra sarkomer kısalması ve kasılma hızı gibi fonksiyonel özellikleri, optik bazlı niceleme kullanılarak değerlendirilir. Kas lifi kültürünün bu sistemle birleştirilmesi, farmakolojik ajanların kasılma fonksiyonu üzerindeki etkilerinin yüksek verimli test edilmesine ve genetik kas bozukluklarının ex vivo çalışmalarına izin verir. Son olarak, bu protokol canlı hücre mikroskobu kullanarak kas liflerindeki dinamik hücresel süreçleri incelemek için de uyarlanabilir.