Abstract
Biology
الطفرات في جين الالتهام الذاتي WDR45 / WIPI4 هي سبب التنكس العصبي المرتبط بمروحة بيتا (BPAN) ، وهو نوع فرعي من الأمراض البشرية يعرف باسم التنكس العصبي مع تراكم الحديد في الدماغ (NBIA) بسبب وجود رواسب الحديد في أدمغة المرضى. يتم تنظيم مستويات الحديد داخل الخلايا بإحكام من خلال عدد من الآليات الخلوية ، بما في ذلك الآلية الحرجة للفيريتينوفاجي. تصف هذه الورقة كيف يمكن تقييم الفيريتينو فاجي في الخلايا الليفية البشرية الأولية المشتقة من الجلد. في هذا البروتوكول ، نستخدم ظروف تعديل الحديد لتحفيز أو تثبيط الفيريتينوفاجي على المستوى الخلوي ، مثل إعطاء بافيلوميسين A1 لتثبيط وظيفة الليزوزوم وسترات الأمونيوم الحديديك (FAC) أو علاجات ديفيراسيوكس (DFX) لزيادة أو استنفاد الحديد ، على التوالي. ثم تخضع هذه الخلايا الليفية المعالجة للتصوير عالي الإنتاجية وتحليل التوطين الكمي القائم على CellProfiler للفيريتين الداخلي وعلامات البلعمة الذاتية / الليزوزومية ، هنا LAMP2. بناء على مستوى الفيريتين البلعمي الذاتي / الليزوزومي ، يمكن استخلاص استنتاجات بشأن مستوى الفيريتينوفاجي. يمكن استخدام هذا البروتوكول لتقييم الفيريتينوفاجي في الخلايا الليفية الأولية المشتقة من BPAN أو أنواع أخرى من خلايا الثدييات.
Explore More Videos
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved