分离、表征和总 DNA 提取以鉴定真菌异养植物中的内生真菌

霉菌异养植物是菌根依赖性最极端的形式之一，完全丧失了自养能力。与任何其他重要资源一样重要，与这些植物密切相关的真菌对它们来说是必不可少的。因此，研究真菌异养物种的一些最相关的技术是能够研究相关真菌的技术，尤其是那些栖息在根部和地下器官中的真菌。在这种情况下，通常应用鉴定培养依赖性和培养依赖性内生真菌的技术。分离真菌内生菌为形态学鉴定它们、分析它们的多样性和维持接种物提供了一种用于兰花种子共生萌发的方法。然而，众所周知，有大量不可培养的真菌栖息在植物组织中。因此，不依赖文化的分子鉴定技术提供了更广泛的物种多样性和丰度。本文旨在为启动两个调查程序提供必要的方法支持：一个是依赖于文化的调查程序，另一个是独立的调查程序。关于培养依赖性方案，详细介绍了从收集地点到实验室设施收集和维护植物样品的过程，以及从真菌异养植物的地下和地上器官中分离丝状真菌，保留分离物的集合，通过载玻片培养方法对菌丝进行形态学表征，以及通过总DNA提取对真菌进行分子鉴定。包括不依赖培养的方法，详细程序包括收集植物样本进行宏基因组分析和使用商业试剂盒从叶绿素植物器官中提取总DNA。最后，还建议使用连续性方案（例如，聚合酶链反应 [PCR]、测序）进行分析，并在此处介绍技术。