Flow Sitometride Bacillus subtilis Spor Sayımı ve Etiket Analizinin İyileştirilmesi

Bacillus subtilis'in sporları, farklı biyoteknolojik ve immünolojik uygulamalar için zaten önerilmiştir; Bununla birlikte, sporların yüzeyinde hareketsiz hale getirilen antijenlerin miktar tayinleri ile birlikte tespitini iyileştiren metodolojilerin geliştirilmesine artan bir ihtiyaç vardır. Akış sitometrisine dayalı analizler daha önce B. subtilis'in etiketli hücrelerini tespit etmek için hızlı, güvenilir ve spesifik yaklaşımlar olarak önerilmiştir. Burada, sporun yüzeyindeki bir floresan antikorun (FA) görüntüleme verimliliğini değerlendirmek ve sayma boncukları kullanarak spor sayısını ölçmek için akış sitometrisinin kullanılmasını öneriyoruz.

Bunun için DNA markörü olarak etidyum bromür ve yüzey markörü olarak sporlara bağlı allofikosiyanin (APC) etiketli antikor kullandık. Sporların miktarının belirlenmesi, sayma boncukları kullanılarak gerçekleştirildi, çünkü bu teknik hücrelerin tespitinde yüksek doğruluk gösteriyor. Etiketli sporlar, eşleşmeyi doğrulayan bir akış sitometresi kullanılarak analiz edildi. Sonuç olarak, DNA etiketlemesinin, çimlenmiş sporların tespiti için akış sitometrisi ile miktar tayininin doğruluğunu geliştirdiği gösterilmiştir. Etidyum bromürün hareketsiz sporları etiketleyemediği gözlemlendi; Bununla birlikte, bu teknik, yüzeylerine bağlı floresan proteini ile sporların sayısının daha kesin bir şekilde belirlenmesini sağlar, böylece sporların farklı uygulamalarda biyoteknolojik bir platform olarak kullanımına odaklanan çalışmaların geliştirilmesine yardımcı olur.