Isolering og identifisering av mesenkymale stamceller avledet fra fettvev av Sprague Dawley-rotter

Voksne mesenkymale celler har revolusjonert molekylær- og cellebiologi de siste tiårene. De kan differensiere i forskjellige spesialiserte celletyper, i tillegg til deres store kapasitet for selvfornyelse, migrasjon og spredning. Fettvev er en av de minst invasive og mest tilgjengelige kildene til mesenkymale celler. Det har også blitt rapportert å ha høyere utbytte sammenlignet med andre kilder, samt overlegne immunmodulerende egenskaper. Nylig har forskjellige prosedyrer for å skaffe voksne mesenkymale celler fra forskjellige vevskilder og dyrearter blitt publisert. Etter å ha evaluert kriteriene til noen forfattere, standardiserte vi en metodikk som er anvendelig for forskjellige formål og lett reproduserbar. En pool av stromal vaskulær fraksjon (SVF) fra perirenalt og bitestikkelen fettvev gjorde det mulig å utvikle primærkulturer med optimal morfologi og funksjonalitet. Cellene ble observert festet til plastoverflaten i 24 timer, og viste en fibroblastlignende morfologi, med forlengelser og en tendens til å danne kolonier. Flowcytometri (FC) og immunfluorescens (IF) teknikker ble brukt for å vurdere ekspresjonen av membranmarkørene CD105, CD9, CD63, CD31 og CD34. Evnen til fettavledede stamceller (ASC) til å differensiere i den adipogene linjen ble også vurdert ved hjelp av en cocktail av faktorer (4 μM insulin, 0,5 mM 3-metyl-iso-butyl-xanthin og 1 μM deksametason). Etter 48 timer ble det observert et gradvis tap av fibroblastoid morfologi, og etter 12 dager ble tilstedeværelsen av lipiddråper positive til oljerødfarging bekreftet. Oppsummert foreslås en prosedyre for å oppnå optimale og funksjonelle ASC-kulturer for anvendelse i regenerativ medisin.