Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

В этом исследовании описаны этапы получения изображений мозга новорожденных мышей с высоким разрешением путем сочетания микрокомпьютерной томографии (микро-КТ) и контрастного вещества в образцах ex vivo . Мы описываем основные морфометрические анализы для количественной оценки размера и формы мозга на этих изображениях.

Abstract

Нейроизображения являются ценным инструментом для изучения морфологии мозга в экспериментах на животных моделях. Магнитно-резонансная томография (МРТ) стала стандартным методом для мягких тканей, хотя ее низкое пространственное разрешение накладывает некоторые ограничения на мелких животных. В данной статье мы описываем протокол получения трехмерной (3D) информации высокого разрешения о мозге и черепе новорожденных мышей с помощью микрокомпьютерной томографии (микро-КТ). Протокол включает в себя шаги, необходимые для препарирования образцов, окрашивания и сканирования мозга, а также получения морфометрических измерений всего органа и областей интереса (ROI). Анализ изображений включает в себя сегментацию структур и оцифровку координат точек. В целом, эта работа показывает, что комбинация микро-КТ и раствора Люголя в качестве контрастного вещества является подходящей альтернативой для визуализации перинатального мозга мелких животных. Этот рабочий процесс визуализации находит применение в биологии развития, биомедицине и других науках, заинтересованных в оценке влияния различных генетических факторов и факторов окружающей среды на развитие мозга.

Introduction

Микрокомпьютерная томография (микро-КТ) является ценным инструментом для различных областей исследований. В биологии он особенно подходит для исследования костей из-за поглощения рентгеновских лучей в минерализованных тканях. Благодаря этой особенности различные вопросы, касающиеся развития костей1, метаболизма2 и эволюции 3,4, а также других тем, были решены с помощью микро-КТ. В 2008 году de Crespigny et al.5 показали, что микро-КТ-изображения мозга взрослых мышей и кроликов могут быть получены с использованием йода....

Protocol

Все экспериментальные процедуры проводились в соответствии с рекомендациями Канадского совета по уходу за животными.

1. Отбор и подготовка проб

  1. Приготовьте 500 мл 4% параформальдегида (PFA).
    1. Под флюсом для экстракции в шкафу добавьте 20 г порошка PFA к 250 мл 1x ф.......

Representative Results

Представлен базовый протокол получения изображений мозга новорожденных мышей с высоким разрешением. Головы сканировали после погружения в раствор Люголя. Несмотря на небольшие размеры, можно выделить основные анатомические структуры мозга, такие как обонятельные луковицы, кора, сре?.......

Discussion

В данной работе представлен краткий протокол сканирования тканей головного мозга новорожденных мышей с помощью микро-КТ с контрастным веществом. Кроме того, он включает в себя простые процедуры для получения количественных и качественных результатов. На основе этих методов могут быт?.......

Disclosures

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Acknowledgements

Благодарим Вэй Лю за техническую помощь. Эта работа финансируется ANPCyT PICT 2017-2497 и PICT 2018-4113.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
 µCT 35Scanco Medical AGNote that Scanco does not offer the  µCT 35 anymore. Their smallest scanner is now the  µCT 45 
AvizoVisualization Sciences Group, VSG
C57BL/6 MiceBioterio Facultad de Ciencias Veterinarias Universidad Nacional de La Plata
Conical tubesDaiggerCH-CI4610-1856
Flux cabinetEscoAC2-458 
Glass beaker GlasscoGL-229.202.10
Glass bottleSimaxCFB017
Glass funnelHDAVI1108
HClCarlo Erba403872Manipulate under a flux cabinet and use personal protective equipment (mask, glass and gloves)
I2Cicarelli804211When preparing I2KI, manipulate under a flux cabinet and use personal protective equipment (mask, glass and gloves)
KICicarelliPA131542.1210When preparing I2KI, manipulate under a flux cabinet and use personal protective equipment (mask, glass and gloves)
Magnetic stirringArcano4925
NaOHCicarelli1580110Manipulate under a flux cabinet and use personal protective equipment (mask, glass and gloves)
Orbital shakerBiomintBM021
Paraformaldehyde Biopack2000959400Manipulate under a flux cabinet and use personal protective equipment (mask, glass and gloves)
Paton spatulaGlasscoGL-377.303.01
PBSBiopack2000988800
Plastic Pasteur pipetteDaigger9153
RR ProjectThe package geomorph for R was used in the protocol (https://cran.r-project.org/web/packages/geomorph/index.html)
Scissors Belmed
Sodium azideBiopack2000163500
ThermometerDaigger7650

References

  1. Altman, A. R., et al. Quantification of skeletal growth, modeling, and remodeling by in vivo micro-computed tomography. Bone. 81, 370-379 (2015).
  2. Wehrle, E., et al.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

1953DROI

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved