A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
В этом исследовании описаны этапы получения изображений мозга новорожденных мышей с высоким разрешением путем сочетания микрокомпьютерной томографии (микро-КТ) и контрастного вещества в образцах ex vivo . Мы описываем основные морфометрические анализы для количественной оценки размера и формы мозга на этих изображениях.
Нейроизображения являются ценным инструментом для изучения морфологии мозга в экспериментах на животных моделях. Магнитно-резонансная томография (МРТ) стала стандартным методом для мягких тканей, хотя ее низкое пространственное разрешение накладывает некоторые ограничения на мелких животных. В данной статье мы описываем протокол получения трехмерной (3D) информации высокого разрешения о мозге и черепе новорожденных мышей с помощью микрокомпьютерной томографии (микро-КТ). Протокол включает в себя шаги, необходимые для препарирования образцов, окрашивания и сканирования мозга, а также получения морфометрических измерений всего органа и областей интереса (ROI). Анализ изображений включает в себя сегментацию структур и оцифровку координат точек. В целом, эта работа показывает, что комбинация микро-КТ и раствора Люголя в качестве контрастного вещества является подходящей альтернативой для визуализации перинатального мозга мелких животных. Этот рабочий процесс визуализации находит применение в биологии развития, биомедицине и других науках, заинтересованных в оценке влияния различных генетических факторов и факторов окружающей среды на развитие мозга.
Микрокомпьютерная томография (микро-КТ) является ценным инструментом для различных областей исследований. В биологии он особенно подходит для исследования костей из-за поглощения рентгеновских лучей в минерализованных тканях. Благодаря этой особенности различные вопросы, касающиеся развития костей1, метаболизма2 и эволюции 3,4, а также других тем, были решены с помощью микро-КТ. В 2008 году de Crespigny et al.5 показали, что микро-КТ-изображения мозга взрослых мышей и кроликов могут быть получены с использованием йода....
Все экспериментальные процедуры проводились в соответствии с рекомендациями Канадского совета по уходу за животными.
1. Отбор и подготовка проб
Представлен базовый протокол получения изображений мозга новорожденных мышей с высоким разрешением. Головы сканировали после погружения в раствор Люголя. Несмотря на небольшие размеры, можно выделить основные анатомические структуры мозга, такие как обонятельные луковицы, кора, сре?.......
В данной работе представлен краткий протокол сканирования тканей головного мозга новорожденных мышей с помощью микро-КТ с контрастным веществом. Кроме того, он включает в себя простые процедуры для получения количественных и качественных результатов. На основе этих методов могут быт?.......
Благодарим Вэй Лю за техническую помощь. Эта работа финансируется ANPCyT PICT 2017-2497 и PICT 2018-4113.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
µCT 35 | Scanco Medical AG | Note that Scanco does not offer the µCT 35 anymore. Their smallest scanner is now the µCT 45 | |
Avizo | Visualization Sciences Group, VSG | ||
C57BL/6 Mice | Bioterio Facultad de Ciencias Veterinarias Universidad Nacional de La Plata | ||
Conical tubes | Daigger | CH-CI4610-1856 | |
Flux cabinet | Esco | AC2-458 | |
Glass beaker | Glassco | GL-229.202.10 | |
Glass bottle | Simax | CFB017 | |
Glass funnel | HDA | VI1108 | |
HCl | Carlo Erba | 403872 | Manipulate under a flux cabinet and use personal protective equipment (mask, glass and gloves) |
I2 | Cicarelli | 804211 | When preparing I2KI, manipulate under a flux cabinet and use personal protective equipment (mask, glass and gloves) |
KI | Cicarelli | PA131542.1210 | When preparing I2KI, manipulate under a flux cabinet and use personal protective equipment (mask, glass and gloves) |
Magnetic stirring | Arcano | 4925 | |
NaOH | Cicarelli | 1580110 | Manipulate under a flux cabinet and use personal protective equipment (mask, glass and gloves) |
Orbital shaker | Biomint | BM021 | |
Paraformaldehyde | Biopack | 2000959400 | Manipulate under a flux cabinet and use personal protective equipment (mask, glass and gloves) |
Paton spatula | Glassco | GL-377.303.01 | |
PBS | Biopack | 2000988800 | |
Plastic Pasteur pipette | Daigger | 9153 | |
R | R Project | The package geomorph for R was used in the protocol (https://cran.r-project.org/web/packages/geomorph/index.html) | |
Scissors | Belmed | ||
Sodium azide | Biopack | 2000163500 | |
Thermometer | Daigger | 7650 |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved