A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
אנו מתארים פרוטוקול להערכת עקומות מנה-תגובה לגירוי חוץ-גולגולתי במונחים של מדידות שדה חשמלי במוח וזרימת דם רלוונטית של סמן ביולוגי-מוחי. מכיוון שפרוטוקול זה כולל החדרת אלקטרודות פולשניות למוח, יש צורך בהרדמה כללית, כאשר נשימה ספונטנית עדיפה על פני נשימה מבוקרת.
זיהוי תגובות זרימת דם מוחיות (CBF) לצורות שונות של הפעלה עצבית הוא קריטי להבנת תפקוד המוח הדינמי ושינויים באספקת המצע למוח. מאמר זה מתאר פרוטוקול למדידת תגובות CBF לגירוי זרם חילופין תוך גולגולתי (tACS). עקומות מנה-תגובה מוערכות הן משינוי CBF המתרחש עם tACS (mA) והן מהשדה החשמלי התוך גולגולתי (mV/mm). אנו מעריכים את השדה החשמלי התוך-גולגולתי בהתבסס על המשרעות השונות שנמדדו על-ידי מיקרואלקטרודות זכוכית בכל צד של המוח. במאמר זה, אנו מתארים את מערך הניסוי, הכולל שימוש בבדיקות דופלר לייזר דו-צדדיות (LD) או בדימות כתמי לייזר (LSI) כדי למדוד את CBF; כתוצאה מכך, מערך זה דורש הרדמה לצורך מיקום האלקטרודה ויציבותה. אנו מציגים מתאם בין תגובת CBF לבין הזרם כפונקציה של גיל, ומראים תגובה גדולה משמעותית בזרמים גבוהים יותר (1.5 mA ו- 2.0 mA) בחיות ביקורת צעירות (12-14 שבועות) בהשוואה לחיות מבוגרות יותר (28-32 שבועות) (p < 0.005 הפרש). אנו גם מדגימים תגובת CBF משמעותית בעוצמות שדה חשמלי <5 mV/mm, המהווה שיקול חשוב במחקרים בבני אדם בסופו של דבר. תגובות CBF אלה מושפעות מאוד גם משימוש בהרדמה בהשוואה לבעלי חיים ערים, מבקרת הנשימה (כלומר, נשימה אינטובטית לעומת נשימה ספונטנית), גורמים סיסטמיים (כלומר,CO2) והולכה מקומית בתוך כלי הדם, המתווכת על ידי פריציטים ותאי אנדותל. באופן דומה, טכניקות הדמיה/הקלטה מפורטות יותר עשויות להגביל את גודל השדה מהמוח כולו לאזור קטן בלבד. אנו מתארים את השימוש באלקטרודות חוץ-גולגולתיות ליישום גירוי tACS, כולל עיצובי אלקטרודות ביתיות ומסחריות עבור מכרסמים, המדידה המקבילה של CBF והשדה החשמלי התוך גולגולתי באמצעות אלקטרודות הקלטה DC מזכוכית דו-צדדית, וגישות ההדמיה. אנו מיישמים כיום טכניקות אלה כדי ליישם פורמט לולאה סגורה להגדלת CBF במודלים של בעלי חיים של מחלת אלצהיימר ושבץ.
גירוי חשמלי תוך גולגולתי (tES; עם גירוי גל סינוס, tACS) היא גישה נפוצה, חיצונית ולא פולשנית לנוירומודולציהמוחית 1,2. בעבר, שיערנו כי במינונים מסוימים, tES (ובמיוחד tACS) עשוי להגביר את זרימת הדם במוח (CBF) באזורי המוח הבסיסיים3. יתר על כן, קשר מנה-תגובה עשוי להתקיים בין הזרם החיצוני המופעל או השדה החשמלי תוך גולגולתי לבין תגובות CBF הנובעות מכך. עם זאת, רוב פרוטוקולי הגירוי הקליניים התמקדו ברמת גירוי מקסימלית נוחה של העור (כלומר, ~ 2 mA) לפרקי זמן מתוכננים (כלומר, 30-45 דקות) כפרוטוקול טיפול 4,5. במכרסמים ניתן להשתמש באלקטרודות ....
כל הנהלים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת דיוק או הרשות המקומית המקבילה המסדירה מחקרים בבעלי חיים. עיין בטבלת החומרים לקבלת פרטים על כל החומרים, המכשירים והציוד המשמשים בפרוטוקול זה.
1. הכנת מכשירים
תוצאות מייצגות מוצגות באיור 4, איור 5 ואיור 6. איור 4 מראה דוגמה של ארבע התעלות עם שתי אלקטרודות ההקלטה התוך-גולגולתית בתעלות העליונות ותגובות CBF בתעלות התחתונות. ה-tACS סימטרי לאורך הגולגולת, אולם באופן כללי, תגובת השדה התוך-גול?.......
פרוטוקול זה מתמקד במדידה in vivo, מורדמת, של תגובת CBF כסמן ביולוגי להערכת תגובת המוח ל-tES14. סמנים ביולוגיים ארוכי טווח של תגובת tES כוללים השפעות טיפול היסטולוגיות, כגון מניעה או שינויים בהיווצרות רובד העמילואיד (כלומר, עם גירוי גמא ב -40 הרץ במספר מודלים של אלצהיימר)16,17.......
מחקר זה נתמך על ידי המענקים הבאים (ל- D.A.T.): NIA RO1 AG074999, NIA R21AG051103, VA I21RX002223 ו- VA I21 BX003023.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Alcohol pads | HenryShein | 112-6131 | |
Baby mineral oil | Johnson & Johnson | ||
BD 1 mL syringe | Becton Dikinson | REF 305699 | |
C3 Flat Surface Electrodes | Neuronexus | ||
C57BI mice | from NIH colonies | ||
Copper skull electrods | In house preparation | ||
Digidata 1440, Clampex | Axon Instruments | ||
Dumont #5 forceps | FST | #5 | |
Dumont #7 forceps curved | Dumont | RS-5047 | |
Eye ointment | Major | LubiFresh P.M. NDC-0904-6488-38 | |
Flaming/Brown micropipette puller | Sutter instrument Co. | Model P-87 | |
Forceps 11.5 cm slight curve serrated | Roboz | RS-8254 | |
Intramedic needle 23 G | Becton Dikinson | REF 427565 | |
KCl 1 M | In house preparation | ||
Laser Doppler Probes | Moor Instruments | 0.46 mm laser doppler probes | |
Laser Speckle Imaging Device | RWD | RFLSI-ZW | |
Micro curette 13 cm | FST | 10080-05 | |
Micro Dissecting Scissors, 11.5 cm | Roboz | RS-5914 | |
Mouse anesthesia fixation | Stoelting | ||
Neuroconn-DS | Neurocare | DC-Stimulator Plus | |
PhysioSuite Monitoring | Kent Scientific | ||
Q-tips | Fisherbrand | 22363167 | |
Saline 0.9% NaCl solution | Baxter | 281322 | |
Sensicam QE | PCO Instruments | ||
Software | Axon Instruments Clampex | ||
Surgical glue | Covetrus | 31477 | |
Surgical tape | 3M Transpore | T9784 |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved