A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
בידוד ותרבית של מקרופאגים סינוביאליים ראשוניים ופיברובלסטים מרקמת דלקת מפרקים מורין
In This Article
Summary
המחקר הנוכחי מספק פרוטוקול שונה לבידוד מקרופאגים סינוביאליים ופיברובלסטים מרקמת דלקת מפרקים דלקתית מורין.
Abstract
דלקת מפרקים שגרונית היא מחלה אוטואימונית המובילה לדלקת כרונית של המפרקים. מקרופאגים סינוביאליים ופיברובלסטים סינוביאליים ממלאים תפקידים מרכזיים בפתוגנזה של דלקת מפרקים שגרונית. חשוב להבין את תפקידיהן של שתי אוכלוסיות התאים כדי לחשוף את המנגנונים העומדים בבסיס התקדמות פתולוגית והפוגה בדלקת מפרקים דלקתית. באופן כללי, תנאי ניסוי חוץ גופיים צריכים לחקות את הסביבה in vivo ככל האפשר. תאים ראשוניים שמקורם ברקמה שימשו בניסויים המאפיינים פיברובלסטים סינוביאליים בדלקת פרקים. לעומת זאת, בניסויים שחקרו את התפקודים הביולוגיים של מקרופאגים בדלקת מפרקים דלקתית, נעשה שימוש בקווי תאים, מקרופאגים שמקורם במח עצם ומקרופאגים שמקורם במונוציטים בדם. עם זאת, לא ברור אם מקרופאגים כאלה אכן משקפים את תפקודם של מקרופאגים שוכני רקמות. כדי להשיג מקרופאגים מקומיים, פרוטוקולים קודמים שונו כדי לבודד ולהרחיב הן מקרופאגים ראשוניים והן פיברובלסטים מרקמה סינוביאלית במודל עכבר של דלקת מפרקים דלקתית. תאים סינוביאליים ראשוניים אלה עשויים להיות שימושיים לניתוח חוץ גופי של דלקת מפרקים דלקתית.
Introduction
דלקת מפרקים שגרונית (RA) היא מחלה אוטואימונית המאופיינת בהיפרפלזיה של הסינוביום, המובילה להרס מפרקים 1,2. מקרופאגים ופיברובלסטים שומרי רקמות נמצאים בסינוביום בריא כדי לשמור על הומאוסטזיס משותף. בחולי RA, פיברובלסטים סינוביאליים (SFs) מתרבים, ותאים חיסוניים, כולל מונוציטים, מסתננים לתוך סינוביום ונוזל המפרקים, תהליכים הקשורים לדלקת 1,3,4. מקרופאגים סינוביאליים (SMs), הכוללים מקרופאגים תושבים ומקרופאגים היקפיים שמקורם במונוציטים בדם, ו-SFs מופעלים באופן חריג ויש להם תפקידים חשובים בפתוגנזה של RA. מחקרים אחרונים הראו כי ....
Protocol
ניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה לניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת Ehime ובוצעו בהתאם להנחיות אוניברסיטת Ehime לניסויים בבעלי חיים (37A1-1*16).
1. הכנת מכשירים, ריאגנטים ומדיום תרבית
- הכינו את מדיום התרבית באופן הבא: השלימו את מדיום הנשר המעובד של דולבקו (DMEM) עם 10% נ.......
Representative Results
נקבות עכברי C57BL/6 בגיל 7-8 שבועות עברו דלקת מפרקים הנגרמת על ידי נוגדני קולגן. תאים דמויי מקרופאגים ותאים דמויי פיברובלסטים בודדו באופן עצמאי מרקמת דלקת מפרקים דלקתית בהתאם להליך שתואר לעיל (איור 2A,B). תאים דמויי מקרופאגים שימשו מיד לאחר שלב 5.7. תאים דמויי פיברובלסטים.......
Discussion
שיטה זו שפותחה כאן משפרת טכניקות קודמות לבידוד הן SFs מדלקת מפרקים מורין והן מקרופאגים תושבים ממספר איברים 7,11. השיטה המתוקנת יכולה לבודד הן מקרופאגים והן פיברובלסטים מסינוביום דלקתי עם טוהר גבוה, והיא פשוטה וניתנת לשחזור. מכיוון שהשיטה אינה דורשת מכשירים מו.......
Disclosures
המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים מתחרים.
Acknowledgements
המחברים מודים לצוות האגף לתמיכה במחקר רפואי, למרכז התמיכה במחקר מתקדם (ADRES), ולחברי החטיבה לפתופיזיולוגיה אינטגרטיבית, מרכז פרוטאו-מדע (PROS), אוניברסיטת אהימה (Ehime), על עזרתם הטכנית ותמיכתם המועילה. מחקר זה נתמך בחלקו על ידי האגודה היפנית לקידום המדע (JSPS) מענקי KAKENHI JP17K17929, JP19K16015, JP21K05974 (ל- NS) ו- JP23689066, JP15H04961, JP15K15552, JP17K19728, JP19H03786 (ל- YI); מענקים מקרן המחקר הרפואי של אוסקה למחלות עקשניות, קרן נקטומי, האגודה היפנית לחקר עצמות ומינרלים (JSBMR) מענק כוכבים עולים, קרן סומיטומו, קרן המחקר הרפואי SENSHIN, קרן הזיכרון מוצ'ידה (ל- NS); ומענק מחקר רפואי של קרן המדע טקדה, מענק פרויקט UCB יפן (UCBJ) ומענק JSBMR Frontier Scientist ....
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5.0 g/L Trypsin/5.3 mmol/L EDTA solution | nacalai tesque | 35556-44 | Diluted with HBSS |
| Antibiotic–antimycotic (anti/anti) | Gibco | 15240-062 | |
| Butterfly needle | TERUMO | SV-23DLK | 23G |
| Cell strainer | Falcon | 352340 | 40 µm pore, Nylon |
| Cellmatrix Type I-C | Nitta gelatin | 637-00773 | Type I-C collagen |
| Centriguge tube 15 | TPP | 91014 | 15 mL tube |
| Centriguge tube 50 | TPP | 91050 | 50 mL tube |
| Collagenase from C. Histolyticum | Sigma | C5138 | Type IV collagenase |
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium GlutaMax (DMEM) | Gibco | 10569-010 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | SIGAM | 173012 | Heat inactivation was performed |
| Hanks' balanced salt solution (HBSS) | Wako | 085-09355 | |
| Scissors | Bio Research Center | PRI28-1525A | |
| Tissue culture dish 40 | TPP | 93040 | For cell culture |
| Tissue culture dish 60 | TPP | 92006 | For cell culture |
| Tweezers | KFI | 1-9749-31 | Fine-point |
| Tweezers | Bio Research Center | PRI28-1522 | Serrated tip |
| ZEISS Stemi 305 | ZEISS | STEMI305-EDU | Stereomicroscope |
References
- Smolen, J. S., Aletaha, D., McInnes, I. B. Rheumatoid arthritis. Lancet. 388 (10055), 2023-2038 (2016).
- McInnes, I. B., Schett, G. The pathogenesis of rheumatoid arthritis. The New England Journal of Medicine. 365 (23), 2205-2219 (2011).
Reprints and Permissions
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved