Uso do Cérebro de Embriões de Pintinhos como Modelo para Análises In Vivo e Ex Vivo do Comportamento Celular de Glioblastoma Humano

O embrião de pintinho tem sido um sistema modelo ideal para o estudo do desenvolvimento de vertebrados, particularmente para manipulações experimentais. O uso do embrião de pintinho foi estendido para estudar a formação de tumores cerebrais de glioblastoma humano (GBM) in vivo e a invasividade de células tumorais no tecido cerebral circundante. Os tumores GBM podem ser formados pela injeção de uma suspensão de células fluorescentemente marcadas no ventrículo mesencéfalo (tecto óptico) E5 em ovo.

Dependendo das células GBM, tumores compactos se formam aleatoriamente no ventrículo e dentro da parede cerebral, e grupos de células invadem o tecido da parede cerebral. Cortes de tecido espesso (350 μm) de tecta E15 fixa com tumores podem ser imunomarcados para revelar que as células invasoras frequentemente migram ao longo dos vasos sanguíneos quando analisadas pela reconstrução 3D de imagens confocais z-stack. Cortes vivos de mesencéfalo e prosencéfalo E15 (250-350 μm) podem ser cultivados em inserções de membrana, onde células GBM marcadas fluorescentemente podem ser introduzidas em locais não aleatórios para fornecer co-culturas ex vivo para analisar a invasão celular, que também pode ocorrer ao longo dos vasos sanguíneos, durante um período de cerca de 1 semana. Essas coculturas ex vivo podem ser monitoradas por microscopia de lapso de tempo de fluorescência confocal ou de campo largo para observar o comportamento de células vivas.

Os cortes co-cultivados podem então ser fixados, imunomarcados e analisados por microscopia confocal para determinar se a invasão ocorreu ou não ao longo dos vasos sanguíneos ou axônios. Além disso, o sistema de co-cultura pode ser usado para investigar potenciais interações célula-célula, colocando agregados de diferentes tipos e cores celulares em diferentes locais precisos e observando os movimentos celulares. Os tratamentos medicamentosos podem ser realizados em culturas ex vivo , enquanto esses tratamentos não são compatíveis com o sistema in ovo . Essas duas abordagens complementares permitem análises detalhadas e precisas do comportamento de células GBM humanas e da formação de tumores em um ambiente cerebral de vertebrados altamente manipulável.