Использование мозга эмбриона цыпленка в качестве модели для анализа поведения клеток глиобластомы человека in vivo и ex vivo

Эмбрион цыпленка был идеальной модельной системой для изучения развития позвоночных, особенно для экспериментальных манипуляций. Использование куриного эмбриона было расширено для изучения образования опухолей головного мозга при глиобластоме человека (GBM) in vivo и инвазивности опухолевых клеток в окружающие ткани мозга. Опухоли GBM могут образовываться путем инъекции суспензии флуоресцентно меченных клеток в желудочек среднего мозга E5 (оптический тектум) в яйцеклетной оболочке.

В зависимости от клеток GBM компактные опухоли случайным образом образуются в желудочке и внутри стенки мозга, а группы клеток вторгаются в ткань стенки мозга. Толстые срезы ткани (350 мкм) фиксированной текты E15 с опухолями могут быть иммуноокрашены, чтобы выявить, что вторгшиеся клетки часто мигрируют по кровеносным сосудам при анализе с помощью 3D-реконструкции конфокальных изображений z-стека. Живые срезы среднего и переднего мозга E15 (250-350 мкм) могут культивироваться на мембранных вставках, где флуоресцентно меченные клетки GBM могут быть введены в неслучайные места, чтобы обеспечить совместные культуры ex vivo для анализа клеточной инвазии, которая также может происходить вдоль кровеносных сосудов, в течение периода около 1 недели. Эти кокультуры ex vivo можно контролировать с помощью широкопольной или конфокальной флуоресцентной покадровой микроскопии для наблюдения за поведением живых клеток.

Затем совместно культивируемые срезы могут быть зафиксированы, иммуноокрашены и проанализированы с помощью конфокальной микроскопии, чтобы определить, произошло ли вторжение вдоль кровеносных сосудов или аксонов. Кроме того, система совместного культивирования может быть использована для исследования потенциальных межклеточных взаимодействий путем размещения агрегатов различных типов клеток и цветов в разных точных местах и наблюдения за движениями клеток. Медикаментозное лечение может проводиться на культурах ex vivo , тогда как эти методы лечения несовместимы с системой in ovo . Эти два взаимодополняющих подхода позволяют проводить детальный и точный анализ поведения клеток GBM человека и образования опухолей в среде мозга позвоночных, которой можно манипулировать.