Civciv Embriyo Beynini, İnsan Glioblastoma Hücre Davranışının In Vivo ve Ex Vivo Analizleri için Bir Model Olarak Kullanma

Civciv embriyosu, omurgalı gelişiminin incelenmesi için, özellikle deneysel manipülasyonlar için ideal bir model sistem olmuştur. Civciv embriyosunun kullanımı, insan glioblastoma (GBM) beyin tümörlerinin in vivo oluşumunu ve tümör hücrelerinin çevreleyen beyin dokusuna invazivliğini incelemek için genişletilmiştir. GBM tümörleri, floresan olarak etiketlenmiş hücrelerin bir süspansiyonunun ovodaki E5 orta beyin (optik tektum) ventrikülüne enjekte edilmesiyle oluşturulabilir.

GBM hücrelerine bağlı olarak, kompakt tümörler ventrikülde ve beyin duvarında rastgele oluşur ve hücre grupları beyin duvarı dokusunu istila eder. Tümörlü sabit E15 tektasının kalın doku kesitleri (350 μm), konfokal z-stack görüntülerinin 3D rekonstrüksiyonu ile analiz edildiğinde istilacı hücrelerin sıklıkla kan damarları boyunca göç ettiğini ortaya çıkarmak için immünoboya ile boyanabilir. Canlı E15 orta beyin ve ön beyin dilimleri (250-350 μm), floresan olarak etiketlenmiş GBM hücrelerinin, yaklaşık 1 haftalık bir süre boyunca kan damarları boyunca da meydana gelebilen hücre invazyonunu analiz etmek için ex vivo ko-kültürler sağlamak için rastgele olmayan yerlere sokulabileceği membran ekleri üzerinde kültürlenebilir. Bu ex vivo ko-kültürler, canlı hücre davranışını gözlemlemek için geniş alan veya konfokal floresan hızlandırılmış mikroskopi ile izlenebilir.

Ko-kültürlü dilimler daha sonra sabitlenebilir, immünoboyalı olabilir ve istilanın kan damarları veya aksonlar boyunca gerçekleşip gerçekleşmediğini belirlemek için konfokal mikroskopi ile analiz edilebilir. Ek olarak, ko-kültür sistemi, farklı hücre tiplerinin ve renklerinin agregalarını farklı hassas yerlere yerleştirerek ve hücre hareketlerini gözlemleyerek potansiyel hücre-hücre etkileşimlerini araştırmak için kullanılabilir. İlaç tedavileri ex vivo kültürlerde yapılabilirken, bu tedaviler in ovo sistemi ile uyumlu değildir. Bu iki tamamlayıcı yaklaşım, yüksek oranda manipüle edilebilir omurgalı beyin ortamında insan GBM hücre davranışının ve tümör oluşumunun ayrıntılı ve kesin analizlerine izin verir.