荧光染色脂滴分析与3D重建，用于肝脂肪变性评估

脂滴（LDs）是介导脂质储存的特化细胞器，在抑制脂毒性和预防游离脂肪酸（FAs）引起的功能障碍方面起着非常重要的作用。鉴于肝脏在人体脂肪代谢中的关键作用，肝脏一直受到微泡和大泡肝脂肪变性形式的LDs细胞内积累的威胁。LD的组织学表征通常基于脂溶性重氮染料，例如油红O（ORO）染色，但许多缺点一直阻碍了该分析在肝脏标本中的使用。最近，亲脂性荧光团 493/503 因其快速吸收和积累到中性脂滴核心中而变得流行用于可视化和定位 LD。尽管大多数应用在细胞培养中都有很好的描述，但很少有证据表明亲脂性荧光团探针在组织样品中可靠地用作LD成像工具。在本文中，我们提出了一种优化的基于硼二吡咯甲烷（BODIPY）493/503的方案，用于评估来自高脂肪饮食（HFD）诱导的肝脂肪变性动物模型的肝脏标本中的LD。该协议涵盖肝脏样本制备、组织切片、BODIPY 493/503 染色、图像采集和数据分析。我们证明了HFD喂养时肝LD的数量，强度，面积比和直径增加。使用正交投影和3D重建，可以观察到LD核心中性脂质的全部含量，这些脂质显示为近球形液滴。此外，使用荧光团BODIPY 493/503，我们能够区分微囊泡（1μm9μm），从而成功区分微泡和大泡脂肪变性。总体而言，该基于荧光的BODIPY 493/503方案是肝LD表征的可靠且简单的工具，可能是经典组织学方案的补充方法。