Høy gjennomstrømningsscreening for å oppnå krystalltreff for proteinkrystallografi

Røntgenkrystallografi er den mest brukte teknikken for å skille makromolekylære strukturer, men det avgjørende trinnet for å krystallisere et protein til et bestilt gitter som er egnet til diffraksjon, er fortsatt utfordrende. Krystalliseringen av biomolekyler er i stor grad eksperimentelt definert, og denne prosessen kan være arbeidskrevende og uoverkommelig for forskere ved ressursbegrensede institusjoner. Ved National High-Throughput Crystallization (HTX) Center har svært reproduserbare metoder blitt implementert for å lette krystallvekst, inkludert et automatisert 1,536-brønns mikrobatch-under-oljeplateoppsett med høy gjennomstrømning designet for å prøve en bred bredde av krystallisasjonsparametere. Plater overvåkes ved hjelp av toppmoderne bildebehandlingsmodaliteter i løpet av 6 uker for å gi innsikt i krystallvekst, samt å nøyaktig skille verdifulle krystalltreff. Videre effektiviserer implementeringen av en trent kunstig intelligens-scoringsalgoritme for å identifisere krystalltreff, kombinert med et åpen kildekode, brukervennlig grensesnitt for visning av eksperimentelle bilder, prosessen med å analysere krystallvekstbilder. Her beskrives de viktigste prosedyrene og instrumenteringen for fremstilling av cocktailer og krystallisasjonsplater, avbildning av platene og identifisering av treff på en måte som sikrer reproduserbarhet og øker sannsynligheten for vellykket krystallisering.