JoVE Logo

Sign In

Abstract

Biochemistry

Protein kristalografisi için kristal isabetleri elde etmek için yüksek verimli tarama

Published: March 10th, 2023

DOI:

10.3791/65211

1National High-Throughput Crystallization Center, Hauptman-Woodward Medical Research Institute, 2Department of Biochemistry, Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, The State University of New York

Abstract

X-ışını kristalografisi, makromoleküler yapıları ayırt etmek için en yaygın kullanılan tekniktir, ancak bir proteini kırınıma uygun düzenli bir kafese kristalize etmenin önemli adımı zor olmaya devam etmektedir. Biyomoleküllerin kristalleşmesi büyük ölçüde deneysel olarak tanımlanmıştır ve bu süreç sınırlı kaynak kurumlardaki araştırmacılar için emek yoğun ve engelleyici olabilir. Ulusal Yüksek Verimli Kristalizasyon (HTX) Merkezi'nde, kristalleşme parametrelerinin geniş bir genişliğini örneklemek için tasarlanmış otomatik yüksek verimli 1.536 kuyucuklu mikroparti-yağ altı plaka kurulumu da dahil olmak üzere kristal büyümesini kolaylaştırmak için yüksek oranda tekrarlanabilir yöntemler uygulanmıştır. Plakalar, kristal büyümesi hakkında fikir vermek ve değerli kristal vuruşlarını doğru bir şekilde ayırt etmek için 6 hafta boyunca en son teknoloji görüntüleme yöntemleri kullanılarak izlenir. Ayrıca, kristal vuruşlarını tanımlamak için eğitimli bir yapay zeka puanlama algoritmasının uygulanması, deneysel görüntüleri görüntülemek için açık kaynaklı, kullanıcı dostu bir arayüzle birleştiğinde, kristal büyüme görüntülerini analiz etme sürecini kolaylaştırır. Burada, kokteyllerin ve kristalizasyon plakalarının hazırlanması, plakaların görüntülenmesi ve isabetlerin tekrarlanabilirliği sağlayacak ve başarılı kristalleşme olasılığını artıracak şekilde tanımlanması için anahtar prosedürler ve enstrümantasyon açıklanmaktadır.

Explore More Videos

JoVE de Bu Ay

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved