In vivo Helhjernesdannelse af zebrafiskelarver ved hjælp af tredimensionel fluorescensmikroskopi

Som et hvirveldyrs modeldyr er larvezebrafisk meget udbredt inden for neurovidenskab og giver en unik mulighed for at overvåge hele hjernens aktivitet ved cellulær opløsning. Her leverer vi en optimeret protokol til udførelse af helhjernebilleddannelse af larvezebrafisk ved hjælp af tredimensionel fluorescensmikroskopi, herunder prøveforberedelse og immobilisering, prøveindlejring, billedoptagelse og visualisering efter billeddannelse. Den nuværende protokol muliggør in vivo-billeddannelse af strukturen og neuronal aktivitet af en larvezebrafiskhjerne ved en cellulær opløsning i over 1 time ved hjælp af konfokalmikroskopi og specialdesignet fluorescensmikroskopi. De kritiske trin i protokollen diskuteres også, herunder prøvemontering og positionering, forebyggelse af bobledannelse og støv i agarosegelen og undgåelse af bevægelse i billeder forårsaget af ufuldstændig størkning af agarosegelen og lammelse af fisken. Protokollen er blevet valideret og bekræftet i flere indstillinger. Denne protokol kan let tilpasses til billeddannelse af andre organer hos en larvezebrafisk.