In Vivo Beeldvorming van de hele hersenen van zebravislarven met behulp van driedimensionale fluorescentiemicroscopie

Als gewerveld modeldier worden larvale zebravissen veel gebruikt in de neurowetenschappen en bieden ze een unieke kans om de activiteit van de hele hersenen op cellulaire resolutie te volgen. Hier bieden we een geoptimaliseerd protocol voor het uitvoeren van beeldvorming van de hele hersenen van larvale zebravissen met behulp van driedimensionale fluorescentiemicroscopie, inclusief monstervoorbereiding en immobilisatie, monsterinbedding, beeldacquisitie en visualisatie na beeldvorming. Het huidige protocol maakt in vivo beeldvorming van de structuur en neuronale activiteit van een larvale zebravisbrein mogelijk met een cellulaire resolutie gedurende meer dan 1 uur met behulp van confocale microscopie en op maat ontworpen fluorescentiemicroscopie. De kritieke stappen in het protocol worden ook besproken, waaronder monstermontage en -positionering, het voorkomen van bellenvorming en stof in de agarose-gel en het vermijden van beweging in beelden veroorzaakt door onvolledige stolling van de agarose-gel en verlamming van de vis. Het protocol is gevalideerd en bevestigd in meerdere instellingen. Dit protocol kan eenvoudig worden aangepast voor het in beeld brengen van andere organen van een larvale zebravis.