In vivo Imagerie du cerveau entier de larves de poisson-zèbre à l’aide de la microscopie à fluorescence tridimensionnelle

En tant qu’animal modèle vertébré, le poisson-zèbre larvaire est largement utilisé en neurosciences et offre une occasion unique de surveiller l’activité du cerveau entier à la résolution cellulaire. Ici, nous fournissons un protocole optimisé pour effectuer l’imagerie du cerveau entier des larves de poisson-zèbre à l’aide de la microscopie à fluorescence tridimensionnelle, y compris la préparation et l’immobilisation des échantillons, l’incorporation des échantillons, l’acquisition d’images et la visualisation après imagerie. Le protocole actuel permet l’imagerie in vivo de la structure et de l’activité neuronale d’un cerveau larvaire de poisson-zèbre à une résolution cellulaire pendant plus de 1 h en utilisant la microscopie confocale et la microscopie à fluorescence conçue sur mesure. Les étapes critiques du protocole sont également discutées, y compris le montage et le positionnement de l’échantillon, la prévention de la formation de bulles et de poussière dans le gel d’agarose, et l’évitement des mouvements dans les images causés par la solidification incomplète du gel d’agarose et la paralysie du poisson. Le protocole a été validé et confirmé dans plusieurs contextes. Ce protocole peut être facilement adapté pour l’imagerie d’autres organes d’une larve de poisson zèbre.