Im lebenden Organismus Ganzhirnbildgebung von Zebrafischlarven mittels dreidimensionaler Fluoreszenzmikroskopie

Als Modelltier von Wirbeltieren sind Zebrafischlarven in den Neurowissenschaften weit verbreitet und bieten eine einzigartige Möglichkeit, die Aktivität des gesamten Gehirns mit zellulärer Auflösung zu überwachen. Hier stellen wir ein optimiertes Protokoll für die Durchführung der Ganzhirnbildgebung von Zebrafischlarven mittels dreidimensionaler Fluoreszenzmikroskopie zur Verfügung, einschließlich Probenvorbereitung und -immobilisierung, Probeneinbettung, Bildaufnahme und Visualisierung nach der Bildgebung. Das aktuelle Protokoll ermöglicht die In-vivo-Bildgebung der Struktur und neuronalen Aktivität eines Zebrafischlarvengehirns mit zellulärer Auflösung über 1 h unter Verwendung von konfokaler Mikroskopie und maßgeschneiderter Fluoreszenzmikroskopie. Die kritischen Schritte des Protokolls werden ebenfalls erörtert, einschließlich der Probenmontage und -positionierung, der Verhinderung von Blasenbildung und Staub im Agarosegel und der Vermeidung von Bewegungen in Bildern, die durch eine unvollständige Verfestigung des Agarosegels und eine Lähmung der Fische verursacht werden. Das Protokoll wurde in mehreren Einstellungen validiert und bestätigt. Dieses Protokoll kann leicht für die Bildgebung anderer Organe einer Zebrafischlarve angepasst werden.